二烯丙基二硫醚对单增李斯特菌毒力基因表达的影响
香料,1材料与方法,1材料与试剂,2仪器与设备,3抑菌剂的制备和菌种活化,4最低抑菌浓度(MIC)的测定,5DADS作用下单增李斯特菌生长曲线的测定,6RNA的提取,7RT-qPCR法研究DADS对单增李斯特菌毒
魏丽娜 吴虹燕 李鑫鑫 郝洪顺 万锈琳 高美玲 侯红漫 张公亮 *(1 大连工业大学食品学院 辽宁大连 116034
2 大连工业大学纺织与材料工程学院 辽宁大连 116034
3 辽宁省水产品加工质量安全与控制重点实验室 辽宁大连 116034)
硫醚类香料在中国具有悠久的历史,它除了赋予食品在感官上的特殊风味及生理保健功能外,还具有抗菌消炎,提高机体免疫力,预防和治疗心血管疾病等保健及药理作用[1-2]。二烯丙基二硫醚(Diallyl disulfide,DADS)是一种典型的在大蒜中含量较高的一种硫醚类香料。它含有两个原子,可溶于脂类,具有挥发性等特性[3]。
单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)简称单增李斯特菌,属于革兰阳性无芽孢杆菌李斯特菌属,是四大食源性致病菌之一[4-5]。该菌容易污染食物,引起食物中毒,临床表现为人和动物脑膜炎、败血症及孕妇流产等[6-7]。近年来,有关该菌引起的食物中毒事件频频发生,并造成了人员死亡,引起世界各国高度关注[8-11]。内化素A(inlA)是单增李斯特菌特有的毒力侵袭因子,由inlA基因编码。hlyA基因是单增李斯特菌的毒力标志基因,它所编码的溶血素(listeriolysion O,LLO)是单增李斯特菌的主要毒力因子。转录活化因子(PrfA)由prfA基因编码,在单增李斯特菌感染的过程中,对许多毒力因子均有正调控作用[12-13]。
近年来针对DADS的研究,多侧重于抗癌方面,比如在一些细胞(结肠、乳腺等细胞)癌变早期和晚期阶段可以起到抑制作用。Altonsy等[14]发现DADS可通过干扰细胞循环生长周期的方式,诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡。Nagaraj等[15]研究表明DADS通过影响Bax的线粒体途径而导致人肿瘤细胞半胱天冬酶依赖性凋亡。然而,有关DADS等硫醚类香料对食源性致病菌的研究相对较少。张公亮等[16]考察了DADS等8种常见的硫醚类香料对大肠杆菌等的抑菌活性,结果表明:8种硫醚类香料均具有抑菌效果。前期研究已明确硫醚类香料对常见的致病菌具有良好的抑菌作用,对单增李斯特菌的抑菌机理方面的研究尚不明确。本文选用硫醚类香料DADS为研究对象,以单增李斯特菌为供试菌株,采用RT-qPCR法研究该香料对毒力基因inlA、hlyA、prfA表达的影响。为进一步探索外援物质对单增李斯特菌毒力基因的调控提供一定的参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 ......
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