石 薇 张素敏 王晓闻 贾治勇

    (山西农业大学 山西太谷 030801)

    单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)在自然界广泛存在，是一种兼性厌氧细菌，同时也是一种常见的食源性致病菌，具有致命性[1-2]。单增李斯特菌能在2～42℃的环境下生存，最合适的生长环境温度为30～37℃。由该种菌引起的疾病被称为李斯特菌病，致死率高达30%左右[3-7]。李斯特菌被WHO列为20世纪90年代四大食用致病菌之一，同时也是对中国人的卫生健康具有严重威胁的12种病原微生物之一[8]。我国对于食源性单增李斯特菌的检测十分重视。目前，致病菌检验多采用传统的检测方法、PCR方法及实时荧光PCR法等。传统的检测方法一般需要5～7 d，周期长，过程繁琐；PCR方法及实时荧光PCR方法虽然操作简单，但需要待检样品中菌体达到较高浓度[9-13]。免疫磁性微球选择性好、特异性强，能快速富集浓缩细菌，可以有效避免或减少漏检，缩短检测时间，且可去除食品样品中抑制PCR扩增的成分。本研究先制备免疫磁性糊精微球，通过与其菌体抗原进行特异性的结合而快速且大量的捕获单増李斯特菌，建立一种快速、灵敏的食源性致病菌检测方法。

    1 试验材料

    1.1 材料与试剂

    单增李斯特菌(CMCC54001)，山西省生物研究所。

    抗体Rb a listeria tropina，博奥森生物试剂有限公司；细菌基因组DNA快速提取试剂盒50次，天根生化科技有限公司；50×TAE Buffer、核酸染料、BM 2000 DNA Marker，北京博迈德基因技术有限公司；环氧氯丙烷、氢氧化钠、硫代硫酸钠、琼脂、氯化钠、牛肉膏等均为分析纯级。

    1.2 仪器与设备

    KS50R台式高性能冷冻离心机，凯达科学仪器有限公司；GS-1860凝胶成像系统，北京麦思高科技有限公司；DYCZ-20A电泳槽、WD-9408E电泳仪，北京市六一仪器厂；UV-2100紫外可见分光光度计，上海尤尼柯仪器有限责任公司；HZQF160全温振荡培养箱，哈尔滨市东联电子技术开发有限公司；PYX-Ⅱ隔水式电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂；立式压力蒸汽灭菌器，上海博讯实业有限公司医疗设备厂。

    2 试验方法

    2.1 磁性糊精微球的制备

    称取一定量的糊精、NaOH，加入一定量的蒸馏水，置于85℃水浴锅中糊化30min，直至深红色为止即为水相。以正己烷为油相，加入一定量的表面活性剂司班60和吐温60 ......