吴天福 霍光华 韩启灿 吴 胜 邹长江

    (江西农业大学生物科学与工程学院菌物资源保护与利用江西省重点实验室 南昌 330045)

    柑橘是世界上第一大果树作物，我国种植面积和产量均居世界第一。柑橘主要分布在我国长江中、下游省份，已成为各产区主要的经济支柱[1-2]。然而，柑橘采后贮藏和运输过程中，外界的机械损伤和其自身新陈代谢衰老易于招致病害而造成腐烂，腐烂率达20%～40%[3-4]，其中意大利青霉(Penicillium italicum)和指状绿霉(P.digitatum)是引起柑橘采后腐烂最重要的2种病原菌[5-6]。青绿霉病导致柑橘果实腐烂约占总量的70%～80%[7-8]。现行柑橘采后防腐保鲜的化学防治易引起药物残留、病原抗药性等问题，某些化学杀菌剂被禁用或限制使用[4]。生物源柑橘采后防腐保鲜剂因其环境相容性好，病原难以产生抗药性等特点，逐步成为柑橘采后防腐保鲜主流方法[9]。

    TLC-生物自显影(TBA)因涂布方式及显影方法可分为3种：琼脂扩散法(Agar diffusion)、琼脂覆盖法(Agar overlay)和琼脂喷涂法(Agar spray)[10]。琼脂扩散法又称为琼脂接触法(Agar contact)，通常将层析后的层析纸或展层后的薄层板挥发干有机溶剂后贴在混有孢子的PDA培养基表面进行生物自显影[11]。琼脂覆盖法又称为浸润法(Immersion)，通常是将展层好的薄层板浸入含有孢子悬液的熔融PDA培养基中，或将含有孢子悬液的熔融PDA培养基涂布到薄层板上使其自显影[12]。琼脂喷涂法是在琼脂覆盖法的基础上演变出来的一种直接生物自显影的操作方法[14]，是在薄板表面直接喷洒一层含菌培养基，使其自显影[13-14]；琼脂浇注法(Agar casting)是本实验室将浸润法稍加改良后的一种延伸方法，即将混有病原菌孢子的熔融PDA培养基均匀浇注在展层后的薄层板表面，待琼脂凝固后在适宜条件下进行生物自显影。本实验室筛选到一株野生裸脚菇属Gymnopus sp.(0612-9)大型真菌，其胞外代谢产物对青绿霉病原菌具有很强的抑杀作用。为了研究其抑菌活性物质，利用改良TBA成功实施其活性成分的色谱分离，获得5种单体化合物，其中4种具有抗青绿霉病菌的活性。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    目标菌株：裸脚菇属菌(Gymnopus sp.，0612-9)。

    病原菌株：意大利青霉(Penicillium italicum)、指状绿霉(P.digitatum) ......