刘 欣 曹广添 陶 菲 张素银 杨喆曦 李永德

    (中国计量大学标准化学院 杭州310018)

    食物过敏被视为一种严重的公共营养卫生问题，引起全球广泛的关注[1-2]。大豆是人类和动物主要的蛋白质来源之一，同时也是联合国规定的8类主要致过敏食物之一。研究显示，大豆中的致敏因子极大地影响幼年动物对蛋白质的有效吸收，可以引起人和幼年动物发生过敏反应，因而限制了大豆及其制品在食品和饲料工业中的应用[3-4]。

    近年来试验动物模型成为评价蛋白过敏性的一个重要手段。以小鼠、大鼠和猪为过敏动物试验模型的研究均有报道[5-7]。然而，至今仍存在很多因素限制了动物模型的应用，比如动物的种类、年龄、性别和对过敏原的敏感性，关于大豆蛋白的过敏试验动物模型也鲜有报道。课题组前期试验结果表明：Balb/c 小鼠模型是一种有效评估大豆蛋白过敏的动物模型[8-9]。王翠燕等[10]的研究也证明了Balb/c 小鼠动物模型可用于评价大豆球蛋白的致敏性。

    虽然目前对食物引发个体过敏反应的具体机制尚不清楚，但是许多研究显示食物过敏原的致敏途径是通过胃肠道[11-12]。而食物过敏中黏膜免疫反应的产生一般是由肠黏膜本身对食物抗原口服耐受失败而造成的[13]。黏膜中具有调节、抑制功能的T 淋巴细胞亚群 (Th3，Tr1，CD4+CD25+T 细胞)数量及功能下调，对CD4+T 效应细胞的主动抑制作用降低，导致黏膜中免疫介导的炎症-抗炎平衡破坏，是细胞免疫反应亢进造成肠道损伤的重要原因[14]。目前关于大豆蛋白过敏原诱导的肠道过敏反应发生机理尚未清楚。

    基于此背景，在现有研究基础上，针对目前食品中常见的大豆蛋白中主要过敏成分——大豆球蛋白(glycinin)和β-伴球蛋白(β-conglycinin)，用易致敏的Balb/c 小鼠作为试验动物，通过连续5周的灌胃方式建立过敏试验动物模型。从肠黏膜免疫的角度探讨大豆球蛋白和β-伴球蛋白诱导Balb/c 小鼠黏膜过敏反应的机制，以期为进一步研究大豆球蛋白和β-伴球蛋白的过敏机理以及预防大豆过敏的发生提供科学依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    大豆球蛋白和β-伴球蛋白提取方法参照刘欣[15]的试验方法。T 细胞亚群免疫组化检测试剂盒：EnVisionTM+加强试剂盒产品，CD3、CD4 和CD8 均为鼠来源的单克隆抗体及IgA 免疫组化染色盒，均来自丹麦DAKO 公司；α4β7 整合素为鼠来源，美国Santa Cruz；原位凋亡细胞检测试剂盒(In Situ Cell Death Detection Kit ......