艾杨洋 丁国芳，2* 杨最素 余方苗 唐云平 陈 艳 黄芳芳

    (1 浙江海洋大学食品与医药学院/浙江省海洋生物医用制品工程技术研究中心 浙江舟山316022 2 浙江省海洋水产研究所 浙江舟山316021)

    长鳍金枪鱼(T.alalunga)，别名长鳍鲔，属脊索动物门(Chordata)，辐鳍鱼亚纲(Actinopterygii)，鲈形目(Perciformes)，鲭科(Scombridae)，金枪鱼属(Thunnus)[1]。长鳍金枪鱼为大洋中上层洄游性鱼类，广泛分布于全世界温带及热带海域，我国沿海亦有少量分布。其营养价值较高，鱼肉中粗蛋白含量达到90%以上[2]。随着远洋渔业的快速发展，金枪鱼年产量达到约600 万t，其中长鳍金枪鱼的年产量约占全球金枪鱼产量的7%。金枪鱼鱼肉一般加工成罐头、鱼松等产品，而鱼头、鱼皮、鱼骨等废弃物在总质量中占50%～70%[3]。这些废弃物常被加工成鱼粉等作为饲料或肥料处理，其附加值较低。将废弃物作为海洋功能食品的开发，对于海洋资源的再利用及环境保护具有重要意义。本研究以长鳍金枪鱼废弃物作为原料，通过酶解法提取活性多肽，作用于经H2O2诱导的张氏肝细胞(Chang liver)，以相对增殖率 (relative growth rate，RGR)及肝损伤的检测指标等为依据，探讨该多肽是否对损伤的张氏肝细胞具有保护作用，为长鳍金枪鱼多肽(T.alalunga polypeptide，TAP)的研发提供试验依据。

    1 材料与仪器

    1.1 材料

    长鳍金枪鱼废弃物，宁波今日食品有限公司；张氏肝细胞，中南大学湘雅医学院细胞库；H2O2，DMSO，国药集团化学试剂有限公司；异丙醇，上海生物工程有限公司；NaHCO3，上海虹光化工厂；DMEM，Gibco 公司；胎牛血清，杭州四季青生物制品有限公司；MTT，Sigma 公司；胰蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶，亚太恒信生物科技有限公司；青霉素、链霉素，山东鲁抗医药股份有限公司；AnnexinV-FITC/PI 双染试剂盒，凯基生物工程有限公司；所用试剂盒包括丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乙醇脱氢酶(ADH)，南京建成生物工程研究所。

    1.2 仪器与设备

    PHS-250 pH 计，上海理达仪器厂；Spectra-Max M2 多功能酶标仪，美谷分子仪器(上海)有限公司；Forma3111 CO2细胞培养箱 ......