张馨月 岳晓洁 李铮峥 刘 倩 黄 茜 马美湖 付 星

    (华中农业大学食品科技学院 国家蛋品加工技术研究分中心 武汉 430070)

    壳聚糖酶(EC 3.2.1.132)是一种催化壳聚糖中氨基葡萄糖之间β-1，4-糖苷键，并水解释放壳寡糖的糖基水解酶[1]。由于壳寡糖有比壳聚糖更高效的抗菌、抗氧化、降血脂、降血压、预防感染，控制关节炎以及增强抗肿瘤作用[2]，壳聚糖酶的降解作用广泛应用于农业、食品和生物医药等领域[3]。

    壳聚糖酶主要来自于细菌，有关真菌壳聚糖酶的研究报道相对较少。与细菌酶相比，真菌酶具有高效性和相容性，成本低，适于工业化生产，如酶蛋白的稳定性、广泛的多样性及菌丝体易分离等[4-5]。真菌壳聚糖酶不仅可制备具有生物活性的壳寡糖和真菌原生质体，还可作为针对病原真菌和昆虫的有效生物防治剂，或者应用于生物废物的转化[1]，有较高的经济价值[6]。针对真菌壳聚糖酶的研究，目前主要集中在曲霉属[7-8]、木霉属[9-10]、青霉属[11-13]、毛霉属[14]等，有必要在菌株筛选遗传改良做进一步深入探索[1]。

    菌株发酵产酶可分为液体发酵和固态发酵，普遍采用液体培养基。固态发酵是指微生物在固体物质上生长的发酵过程，微生物生长所需的水分以固体基质吸附状态存在[15]。固态发酵可以使用廉价的农业工业残留物，如麦麸、虾副产品等[1，16]。采用固态发酵更利于霉菌生产高效价的微生物胞外酶，并且被认为是一种经济有效的液体深层发酵替代方法。如闵伟红等[17]经过优化固体发酵条件，使诱变后的枯青霉产纤溶酶总酶活提高1.32倍。另外Silva 等[9]报道了哈茨木霉(T.harzianum)、康宁木霉(T.koningii)、绿色木霉(T.viride)和多孢木霉(T.polyporum)通过固态发酵产壳聚糖酶，并且从温度和pH 值对发酵条件进行优化。淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)是一种在土壤和植被中发现的真菌，较为新颖，于2012 年被Johny等[18]报道。因其有利于防治植物寄生线虫，故作为生防菌大范围应用[19]。Chao 等[20]利用淡紫紫孢菌，采用液体摇床发酵分离纯化出D-氨基葡萄糖苷酶(外切型)，可促进95%的脱乙酰壳聚糖从其非还原端水解并释放氨基葡萄糖(GlcN)，同时利用电喷雾电离质谱分析其水解模式。目前，尚没有关于优化淡紫紫孢菌固体发酵产壳聚糖酶条件的研究报道。本研究旨在筛选出一株新颖、传代稳定及产壳聚糖酶活力高的真菌菌株，利用单因素和响应面设计优化菌株固体发酵产壳聚糖酶条件 ......