刘功良 朱宝生，2 高苏娟 刘 锐 白卫东 费永涛 艾连中 俞剑燊 郭 波

    (1 仲恺农业工程学院轻工食品学院 广州510225 2 广西轻工业科学技术研究院有限公司 南宁530031 3 上海理工大学医疗器械与食品学院 上海200093 4 上海金枫酒业股份有限公司 上海200120 5 广东石湾酒厂集团有限公司 广东佛山528031)

    随着工业水平的发展，工业乙醇的生产越来越偏向于浓醪发酵。与传统发酵相比，浓醪发酵能提高设备利用率，降低能耗，节约成本，提高产物生成率[1-4]。鉴于这些优点，浓醪发酵的研究备受关注。近年来，为使底物更加有效地转化成目标产物，细胞内部的代谢流分布成为研究的重点[5-6]。代谢流分析是代谢网络分析的重要组成，是代谢工程中用以指导遗传操作的重要手段[7-8]。作者从蜂蜜中筛选获得1 株可耐受700 g/L 葡萄糖质量浓度的蜂蜜接合酵母(Zygosacharomyces mellis，Z.mellis)LGL-1，鉴定其种属与抗逆性能，同时对蜂蜜接合酵母LGL-1 的发酵性能进行初步探讨[9]。本文以蜂蜜接合酵母LGL-1 为研究对象，考察其在高糖胁迫下的代谢流，旨在为深入研究酵母菌高糖胁迫应激机制，耐高糖酵母的代谢调控和菌种工业化改造提供理论依据。

    1 材料与仪器

    1.1 菌种

    蜂蜜接合酵母LGL-1，保存于中国典型培养物保藏中心。

    1.2 培养基

    1)高糖培养基[7]称取13 g 麦芽汁，78 g 葡萄糖，溶于100 mL 去离子水中，可得到400 g/L 的高糖培养基，于70 ℃水浴摇匀，溶解后115 ℃灭菌20 min。

    2)常规培养基 称取13 g 麦芽汁，27 g 葡萄糖，溶于100 mL 去离子水中，可得到100 g/L 的常规培养基，于70 ℃水浴摇匀，溶解后115 ℃灭菌20 min。

    1.3 主要试剂

    蒽酮、海藻糖、甘油、乳酸、苹果酸、柠檬酸、α-酮戊二酸，阿拉丁生化科技股份有限公司；硫酸，天津市福晨化学试剂厂。

    1.4 主要设备与仪器

    SHZ-82 水浴恒温摇床，常州市国立试验设备研究所；G716-3 小型台式离心机，广州市正一有限公司；722G 可见光分光光度计，上海一恒科学仪器有限公司；JJ600 精密电子天平，常熟双杰测试仪器厂；LC-20A 液相色谱仪，岛津企业管理(中国)有限公司。

    2 试验方法 ......