许 女 李雅茹 王超宇 张 浩 王如福

    (山西农业大学食品科学与工程学院 山西太谷030801)

    细菌耐药性问题愈加严峻，已成为威胁全球性公共卫生的主要问题。长期以来，国内外科研人员的研究重点在于临床致病菌的耐药性方面，而对非致病菌耐药性的研究和报道较少。近年来，研究焦点逐步转向以食物链为媒介的抗性基因的产生和传播上。乳酸菌是很多发酵制品中的重要菌株，一直被认为是安全的。然而，由于抗生素的不正当使用，越来越多的乳酸菌具有耐药性或者携带耐药基因，大部分耐药基因位于可移动的非染色体遗传因子上，包括质粒、转座子、整合子-基因盒系统、噬菌体等，可通过水平转移进而传递给其它肠道菌株，甚至是致病菌，导致超级细菌的产生，增加抗生素治疗的失败率，给人类的健康带来严重的危害。

    目前对于乳酸菌的耐药性还没有开展系统性研究，主要集中在动物源[1]、乳及乳制品[2-4]中的分离菌株，而关于传统发酵食品，如发酵肉类[5]、泡菜[6]、醋、酒及益生菌制剂[7]中乳酸菌的耐药性研究较少。本文主要研究山西老陈醋醋醅、农家发酵泡菜和发酵乳制品中乳酸菌的耐药表型和基因型，对乳酸菌耐药机制、传播机理的研究提供支持，对保证食品安全具有重要意义。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料与试剂

    发酵乳制品，西藏、内蒙地区农家发酵乳制品；泡菜汁，四川地区农家泡菜；醋醅，山西紫林醋业股份有限公司。

    乳酸菌分离、培养MRS，M17 肉汤/琼脂培养基，北京陆桥技术有限责任公司；细菌提基因组试剂盒，北京博迈德科技发展有限公司；Taq DNA聚合酶、dNTP、10×聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction，PCR) 反应缓冲液、10×Loading Buffer，大连宝生物工程有限公司。

    1.2 主要仪器与设备

    Veriti PCR 扩增仪，美国ABI 公司；电泳成套设备，美国Bio-rad 公司；凝胶成像系统，美国Alpha Innotech 公司；台式高速冷冻离心机，美国Sigma 公司。

    1.3 试验方法

    1.3.1 菌株的分离与鉴定 将样品用生理盐水稀释到10-7～10-9CFU/mL，吸取100 μL 置于加有0.04%溴甲酚紫的MRS 和M17 培养基平板上，37 ℃培养48 h，挑取单个产酸菌落进行生理生化和16S rDNA 菌种鉴定。

    1.3.2 菌株的耐药表型检测 按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)(2008)所推荐的MIC 法进行药物敏感性检测 ......