王 耀 李燕虹 吴佳蓓 邢云瑞 曹金博 陈秀金 李兆周 邓瑞广 胡骁飞*

    (1 河南科技大学食品与生物工程学院 食品加工与安全国家级实验教学示范中心 河南洛阳471023 2 河南省农业科学院 河南省动物免疫学重点实验室 郑州450002)

    大豆富含蛋白质、脂肪和碳水化合物等物质，可为机体提供丰富的营养，是非常重要的食用蛋白、油脂及饲料来源[1]。大豆中也存在一些致敏蛋白和抗营养因子 (Antinutritional factors，ANF)[2]，胰蛋白酶抑制因子(Trypisin inhibitor，TI)是其中重要的一类。TI 可引发过敏反应，也可抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶活性，影响消化吸收，阻碍机体生长[3-4]。TI 主要包括2 种类型[5]：一种是Kunitz 胰蛋白酶抑制因子 (Kunitz trypsin inhibitor，KTI)，分子质量为20～25 ku，主要作用于胰蛋白酶，可与胰蛋白酶等比例结合，不溶于乙醇，对热和酸较敏感，易失活[6]；另一种是Bowman-Birk 胰蛋白酶抑制因子(Bowman-Birk inhibitor，BBI)，分子质量为6～10 ku，含有2 个独立的活性中心，又称为双头抑制因子，可与胰蛋白酶或糜蛋白酶等比例结合或与两种酶同时结合[7]，不溶于丙酮，耐热和酸且不易被酶水解，相比KTI 较为稳定[8-9]。传统检测TI 的方法属于酶化学分析法，其在灵敏度和稳定性方面存在不足，且检测结果无法区分TI 的具体类型[10]。酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 可通过特异性抗体准确识别TI，快速、灵敏分析，是近年来TI 检测方法研究的主要方向之一[11]。该方法应用于KTI 检测的研究报道较多[12-14]，而针对BBI 检测的此类研究相对缺乏。本试验旨在通过动物免疫和细胞融合，筛选制备亲和力高、敏感性好、特异性强的BBI 单克隆抗体(Monoclonal antibody，mAb)，为ELISA等免疫学检测方法的建立提供良好的抗体基础，进而对食品及饲料中大豆致敏蛋白和抗营养因子的高效检测起到技术依据。

    1 材料与方法

    1.1 试剂

    大豆球蛋白(Glycinin)、β-伴大豆球蛋白(βconglycinin)、大豆凝集素(Soybean agglutinin ......