叶玲娴 黄浩然 柳 露 吴遵义 黄建锋 赵广英* 窦文超

    (1 浙江工商大学食品与生物工程学院 浙江省食品安全重点实验室 杭州310018 2 浙江省方圆检测集团股份有限公司 杭州310018)

    克罗诺阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii，C.sakazakii)是一种常见的食源性条件致病菌[1-2]，能导致严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎、败血症等，并能引起成人局部感染和菌血症[3]。婴幼儿配方粉(Powdered infant formula，PIF)被认为是克罗诺阪崎肠杆菌主要的污染途径，是当前引起婴儿脑膜炎、菌血症和坏死性结肠炎疾病，进而导致死亡的主要原因[2]。

    生物素-亲和素系统 (Biotin-avidin system，BAS)是一种以生物素-亲和素之间具有很高结合能力为基础的生物反应放大系统。由于亲和素(Avidin)具有与其它标记示踪物质(如酶、胶体金等)结合的能力[4-5]，且与生物素之间的作用力比抗原抗体的亲和力 (Ka＝105～1011mol-1) 高至少104倍，因此具有高度特异性和稳定性[6-8]。此外，通过生物素亲和素桥接抗体与HRP 可以产生放大效应，使该系统在免疫标记和有关示踪分析方面更加灵敏。

    Fe3O4磁性纳米粒子具有较大的比表面积，良好的生物相容性，有助于简化试验步骤，因此被认为是制作信号转导探针的理想材料，而该材料具有一定的聚集倾向，限制了在实际研究中的应用[9]。由于二氧化硅包覆的核壳式磁性纳米粒子(Fe3O4-SiO2) 可以较好地抑制材料本身的团聚现象，且在水溶液中的分散性良好，经表面改性后具有较强的生物相容性和稳定性，因此被用作该研究的主要纳米材料。

    本研究设计构建了一种以IgG-Biotin-Avidin-HRP 为信号转导探针，结合磁性纳米捕获探针的免疫夹心比色法用于检测克罗诺阪崎肠杆菌。形成的夹心复合物可以催化底物显色，由此将生物信号转化为光学信号并通过酶标仪读出，进而确定光学信号与被测样品中克罗诺阪崎肠杆菌的浓度对数关系，以此实现对克罗诺阪崎肠杆菌的免疫比色测定。

    1 材料和方法

    1.1 材料与试剂

    克罗诺阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii，C.sakazakii，ATCC 29544)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus，S.aureus，ATCC 27217)、鸡白痢鸡伤寒沙门氏菌(Salmonella pullorum and Salmonella gallinarum ......