岳 颖 严 斌，2 刘丽娅 庞淑婕 周闲容 佟立涛 王丽丽 周素梅*

    (1 中国农业科学院农产品加工研究所 农业部农产品加工重点实验室 北京100193 2 湖南省农林工业勘察设计研究总院 长沙410007)

    近年来，伴随着人们生活水平的提高及饮食习惯的变化，腹泻等肠道疾病的发生率逐年增加。研究发现，腹泻的发生与肠道屏障受损(肠上皮损伤)密切相关[1]。Caco-2 细胞源于人结肠癌细胞，结构和功能与人体肠上皮细胞类似，是研究某些食品或药品对肠道屏障保护作用的经典模型[2]。机体受到外界严重刺激后，体内的活性氧等因子剧增，氧化还原体系失衡，导致机体组织发生氧化应激损伤[3]。肠道是机体受到外界刺激最为频繁的器官之一。氧化应激能通过多种途径破坏肠上皮细胞，导致肠上皮屏障功能障碍。

    值得关注的是，小麦蛋白中富含谷氨酰胺(Gln)，而Gln 在维持肠道粘膜结构完整性、促进肠上皮细胞增殖中发挥着不可替代的作用[4]。天然小麦蛋白溶解性和消化吸收性差，通过体外生物酶解技术可有效提高其生物利用性[5]。以往的研究表明小麦蛋白经酶解制备的低聚肽对肠上皮细胞氧化应激损伤具有一定的保护作用[2]。

    蛋白水解物被人体摄入后，体内的蛋白酶会对其进一步消化降解，进而可能会影响其生物活性[6]。然而，目前对于小麦蛋白水解物消化前、后抵御肠上皮细胞氧化应激能力的变化未见报道。本文采用H2O2诱导Caco-2 细胞建立氧化应激损伤模型，用富含Gln 的小麦蛋白水解物样品及其体外模拟消化产物对细胞进行预处理，通过对细胞存活率和CAT，GSH，MDA，SOD 等细胞抗氧化指标的检测，研究不同小麦蛋白水解物及其体外模拟消化产物对肠上皮细胞抵御氧化应激损伤的作用效果。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    小麦蛋白 (俗称谷朊粉)，粗蛋白含量为74.10%，安徽瑞福祥食品有限公司。

    XS 蛋白酶(食品级)，宁夏夏胜实业集团有限公司；Protamex 蛋白酶(食品级)、Alcalase 蛋白酶(食品级)，诺维信(中国)生物技术有限公司；Caco-2 细胞，中科院细胞库；过氧化氢(H2O2)(分析纯级)，天津市大茂化学试剂厂；DMEM/F12 培养基、胎牛血清(FBS)均为分析纯级，美国Gibco 公司；细胞培养瓶/板，美国Corning 公司；超氧化物歧化酶 (SOD) 试剂盒、微量还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒、过氧化氢酶(CAT)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒均为分析纯级，南京建成生物工程研究所；其它试剂均为分析纯级 ......