基于GB 4789.10-2016的银白色葡萄球菌鉴定方法的改进
菌落,菌株,检验,1材料,1菌株,2主要试剂和仪器,2试验方法,1菌株的活化,2初步鉴定,3确证鉴定,4DNA提取,5目的基因鉴定,6统计分析,3结果与分析,1生化鉴定结果,2目的基因鉴定结果
金方宁 张道锋 区楚君 史贤明 施春雷(上海交通大学 农业与生物学院中美食品安全联合研究中心 上海200240)
银白色葡萄球菌 (Staphylococcus argenteus,简称银葡菌)是金黄色葡萄球菌(S.aureus,简称金葡菌)的远源分化谱系之一,于2015年正式鉴定为新物种[1]。由于银葡菌基因组中缺少操纵子crtOPQMN,导致无法合成葡萄球菌黄素(Staphyloxanthin),其细菌菌落为乳白色[2],易与菌落表型为白色的金葡菌相混淆,因此无法通过菌落颜色将二者区分。银葡菌和金葡菌虽然在表型和基因型上有诸多相似之处,但是与金葡菌在核心基因组上存在约10%的差异[2]。常规的生化分析很可能将银葡菌错误地鉴定为金葡菌,16S rRNA 测序分子鉴定方法也无法区分银葡菌和金葡菌[1]。多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)虽可明确区分金葡菌和银葡菌,但金葡菌的7 个MLST基因位点中,aroE 和glpf 很难扩增,需重新设计引物才能完成MLST 分型,这可能导致很多银葡菌分离株在早期研究中未被报道或被忽略[3-4]。
迄今为止,已有20 多个国家和地区相继报道从医院或社区获得银葡菌,证实了银葡菌为全球分布,且多与严重的发病率、死亡率以及医院感染有关[5]。产毒性银葡菌的无症状携带者往往是疾病的潜在来源,也是食品污染的主要风险,可能导致食物中毒。缅甸报道了5 株定植于健康食品加工者的银葡菌分离株[6]。在最近的一次中国零售即食食品金葡菌流行性调查中获得的8 株金葡菌分离株(分离自三亚、广州、成都、湛江、厦门),根据其MLST 分型结果[7]来看,很可能是银葡菌。本课题组报道了6 株在上海和宁波分离得到的银葡菌,其中1 株分离自食物中毒患者肛拭子,1 株分离自五花肉[8]。这些研究表明银葡菌很可能会污染食品,并导致食物中毒。日本报道了3 起与银葡菌相关的食物中毒事件(2010年、2014年和2015年)[9-10]。研究结果表明,这些银葡菌分离株获得携带肠毒素(Staphylococcal enterotoxins)基因的可移动遗传元件(Mobile genetic elements),通过基因水平转移,使得银葡菌高度产毒,提高了食物中毒风险,成为食品安全的新威胁[10]。
由于银葡菌无法合成葡萄球菌黄素,在体外对氧化应激和嗜中性粒细胞杀伤更为敏感[11-12],因此人们认为银葡菌是一种低毒力细菌[2]。然而,基因组学分析表明,银葡菌与金葡菌之间的毒力基因含量没有差异[13-14] ......
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