翟 璐 郭建军 金仁耀* 桑丽雅 王振国 陈笑笑 王伟萍 廖 杰

    (1 浙江工商大学海洋食品研究院 杭州310012 2 浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室 杭州310012 3 海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心 浙江工商大学 杭州310012 4 杭州南开日新生物技术有限公司 杭州310051 5 浙江华才检测技术有限公司 浙江诸暨311800)

    随着社会经济发展以及工业化进程的推进，大量的重金属产物流入环境中，不断累积，对环境造成越来越严重的影响。重金属具有易富集，不易降解等特点，可在环境中长期存在，同时还可通过大气、水和食物链等途径进入人体并产生富集现象，最终导致对人类健康的危害风险越来越大[1-2]。当人体中累积的重金属量超过人体能够耐受的极限后，会产生严重的生殖和遗传毒性反应，长期作用下会导致强烈的致癌、致畸及致突变反应[3-5]。

    为减少重金属对环境和人体的危害性，除了有效减少重金属的排放外，还需加强对重金属的检测，提高检测技术水平和检测能力，以保障重金属安全。目前，检测、分析重金属最广泛的手段有原子吸收光谱分析(AAS)[6-9]、电感耦合等离子发射光谱(ICP-AES)[10-13]、阳极溶出伏安法(ASV)[14-15]、色谱法[16-17]和其它多种联用检测方法，然而这些分析技术所使用的仪器价格昂贵，样品前处理过程复杂，检测分析时间长，需要专业技术人员操作，难以实现在环境及市场等现场的快速检测，在实际应用中存在局限性。免疫分析技术是以抗原抗体特异性反应为基础建立的分析方法，该技术简便、易操作，人员技术要求不高，所用仪器设备价格低廉，分析灵敏度好，能在基层现场实现大容量样本的快速、高效检测，很好的弥补了传统分析技术的不足，而且国外早在20世纪80年代就开展了采用免疫学方法针对重金属离子的检测研究，随后国内也开展了相关研究工作，截止目前已研制出抗汞、铜、镉和铅等重金属离子的特异性抗体，建立并优化了相关的免疫检测方法[18-25]。

    免疫分析方法的建立关键在于优质抗体的研制，而要制备特异性好，灵敏度佳的优质抗体，就需要制备理想的抗原，优质的抗原是获得优质抗体的前提和基础。通常重金属离子的结构非常简单，导致其不能直接作为抗原，而且不能采用传统与蛋白偶联的方法制备人工抗原，需要在重金属离子和载体蛋白之间增加一个中间载体，既能很好地固定重金属离子，又能与载体蛋白有效结合，因此需用特殊的双功能螯合剂，将重金属离子固定后连接到BSA 或者OVA 等常用载体蛋白上制备重金属人工抗原。

    现有研究使用的双功能螯合剂主要有EDTA、DTPA 和ITCBE 等 ......