酶辅助提取南极磷虾磷脂及脂质组学研究
1材料与方法,1原料与试剂,2主要仪器与设备,3试验方法,2结果与分析,1蛋白酶的选择,2优化的提取条件,3响应面优化设计与数据分析,4南极磷虾样品中磷脂脂肪酸化学成分,5南极磷虾样品中磷脂的HILIC-QTOF,MS脂质
俞喜娜 陈 康 张燕平 崔益玮 汪 艺 戴志远 王萍亚 赵巧灵 沈 清*(1 浙江省水产品加工技术联合重点实验室 浙江工商大学海洋食品研究院 杭州310012 2 舟山市食品药品检测检验研究院 浙江舟山316000)
南极磷虾是一种主要生活在南极洲水域的甲壳类动物,生物资源丰富[1]。虽然其体积较小,但是含有丰富的蛋白质及磷脂,磷脂中含大量Ω-3 系列多不饱和脂肪酸链,尤其是 EPA(二十碳五烯酸)和DHA(二十二碳六烯酸)。EPA 可降低胆固醇的含量和血液的黏稠度,促进血液的循环[2]。DHA 可预防心血管疾病和癌症[3],健脑明目[4]。相对于传统鱼油中脂质来说,南极磷虾中的脂质吸收性较高,且无毒副作用,因此具有较高的营养价值。目前国内外生产磷脂的原料主要为蛋黄和大豆,开发南极磷虾资源有利于缓解资源紧缺的问题,研究南极磷虾磷脂的提取和应用不仅具有经济价值,还具有一定的社会价值[5]。
现阶段研究多集中于油脂类(鱼油、虾油)研究,而从海洋生物中提取磷脂的报道较少。传统磷脂提取方法主要有超临界萃取法[6]、超声波[7]和微波酶辅助提取法[8]、有机溶剂萃取法[9]、酶水解结合溶剂法[10]等。如边晶晶等[11]用正己烷和异丙醇溶剂提取南美白对虾虾头中的磷脂;崔益玮等[12]用氯仿和甲醇提取南极磷虾粗脂,并用丙酮纯化。虽然溶剂提取法分离的效率较高,便于连续操作,但磷脂提取率较低[13],操作步骤繁琐,而且磷脂中残留的有机溶剂的含量易超标,有些有机溶剂具有较高毒性,这些原因都使此方法的使用受到限制。超临界萃取法和超声波酶辅助提取法等具有操作温度低,提取成分不易被破坏的优点,然而这些方法的设备昂贵,生产成本较高。陈文娟等[14]采用蛋白酶水解结合溶剂法提取大黄鱼的卵磷脂,并对酶解的工艺条件进行优化,结果表明酶水解法的提取率比溶剂法和超声波法高。
脂质组学是在大范围的分子水平上对细胞脂质组进行研究,其内容主要包括脂质的提取、分离及分析鉴定,进而了解脂质相关的结构信息。目前脂质组学的研究方法有很多,如核磁共振法、软电离质谱技术、气相色谱-质谱联用法等,随着这些技术的快速发展,提高了微量脂质分析检测的准确性和快速性,其在基础医学及药学等领域应用较为广泛,而在食品科学领域的研究相对较少[15]。对于南极磷虾脂质组学的研究有助于开发和利用南极磷虾磷脂,提高相关产品的应用价值。
本试验中采用酶辅助提取法提取南极磷虾中的磷脂,确定最佳的工艺条件,并对磷脂的脂质组学进行研究。
1 材料与方法
1.1 原料与试剂 ......
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