潘 琳 郭慧玲 李丽娜 张文羿 陈永福 孟和毕力格

    (内蒙古农业大学 乳品生物技术与工程教育部重点实验室 农业部奶制品加工重点实验室呼和浩特010018)

    双歧杆菌是一种重要的肠道微生物，可用作益生菌应用于食物、医药和饲料中。双歧杆菌存在于人类体内、动物体内以及食物中。人类和动物的肠道健康与否都会受到双歧杆菌的影响[1]。婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)和长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)被广泛用于食物补充剂中。在人与动物预防性使用抗生素的过程中，导致全球的抗生素耐药性危机[2]。一些有利于人类健康和畜牧业的细菌类群也产生了抗生素耐药性。耐药基因可在相同或者不同类群的细菌之间转移，耐药性评估是食品和饲料中使用的细菌安全性评估的一部分[3]。在用抗生素治疗后，可使用固有抗生素耐药性的菌株来恢复肠道菌群的平衡[4]。然而，双歧杆菌的耐药基因有可能通过移动元件转移到病原体。通过双歧杆菌的耐药表型和基因型分析可以确定耐药基因的转移潜力[5]。本研究中，评估来自不同来源的20 株双歧杆菌分离株的耐药性，并确定它们是否具有将耐药基因转移到其它细菌的能力。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    1.1.1 试验菌株 本试验用菌株见表1，均由内蒙古农业大学乳酸菌菌种保藏库(LABCC)提供。

    1.1.2 试剂 抗生素：氨苄西林(Amp)、庆大霉素(Gen)、卡那霉素(Kan)、链霉素(Str)、新霉素(Neo)、克林霉素(Cli)、利奈唑胺(Lin)、万古霉素(Van)、奎奴普丁/达福普汀(Qui)、四环素(Tet)、利福霉素(Rif)、环丙沙星(Cip)、甲氧苄啶(Tri)、红霉素(Ery)及氯霉素(Chl)，均购自美国Sigma 公司。

    试剂：所用引物，上海桑尼生物有限公司合成；DNA 提取试剂盒(天根)，10×EasyTaq 缓冲液，dNTPs，EasyTaq 酶，10×TBE 缓冲液，核酸染料。

    培养基：标准药敏检测肉汤培养基，Iso-Sensitest，Oxoid；MRS 肉汤培养基，Oxoid；TPY 液体培养基，青岛海博；LSM 液体培养基(90% Iso-Sensitest 肉汤培养基+10% MRS 肉汤培养基)。

    1.2 方法

    1.2.1 抗生素的配制及菌悬液的制备 15 种抗生素(10 种水溶性，5 种水不溶性)的最小抑菌浓度测定详见参考文献[6] ......