陈 境，张晓宁，麻丽丽，鄂晶晶，王俊国

    (内蒙古农业大学食品科学与工程学院 乳品生物技术与工程教育部重点实验室 呼和浩特010018)

    益生菌有助于维持宿主肠道菌群的组成和良好的平衡，可增强宿主对病原体侵入的抵抗力，对肠道健康、代谢紊乱和大脑健康等具有多种有益作用[1-2]。为了更好地利用益生菌，可通过真空冷冻干燥技术制备益生菌菌粉与益生菌发酵剂等。此技术是在低温且真空状态下，具备酶活性丧失少，保存期长等优点[3-5]。然而，在此过程中，要经受冷冻和干燥脱水两个极端环境，不可避免地易造成部分细胞损伤[6]，如关键酶的失活、细胞膜损伤等因素，导致生理活性丧失甚至死亡[7-8]。益生菌需在肠道内以足够的丰度存活才能起到一定作用[9]，通常是不低于7 lg(CFU/mL)，而提高菌株的抗冷冻干燥活性，减少冷冻干燥对益生菌的酶活及细胞膜的损伤是关键。研究发现：通过改变培养基成分[10]，添加冻干保护剂及调整冷冻干燥工艺条件等方式可提高冻干乳酸菌的活力[11-12]。尽管有研究表明通过改变培养条件可以提高冻干乳酸菌的活力，但鲜有研究解析其内在机理。

    本试验中探究了不同初始pH 值培养条件对植物乳杆菌LIP-1 抗冷冻干燥性能的影响，并测定冻干后植物乳杆菌LIP-1 的关键酶活性和细胞膜脂肪酸含量的变化以及细胞膜损伤，探究改变初始pH 值培对植物乳杆菌抗冷冻干燥的影响机理，为进一步提高乳酸菌的抗冷冻干燥活性提供一定的理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    植物乳杆菌LIP-1 (Lactobacillus plantarum LIP-1)是一株分离自新疆地区酸马奶中，具有降血脂功能的益生菌植物乳杆菌[13]。由内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室提供。

    优化MRS 培养基：蔗糖33.35 g，大豆蛋白胨2.95 g，酵母粉2.95 g，酪蛋白胨4.91 g，K2HPO43.3 g、乙酸钠8.25 g、柠檬酸钠3.3 g，VB10.04g，L-半胱氨酸0.05 g，MnSO4·5H2O 0.12 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，吐温80 1 g。

    脱脂乳粉，恒天然有限公司；MRS 液体培基、MRS 琼脂培养基，英国Oxoid 试剂公司；LIVE/DEAD BacLight Bacteiral Viability Kit L7012 试剂盒；酶活性测定试剂盒，索来宝试剂公司；脂肪酸提取试剂(氯仿有机色谱纯、甲醇、甲醇钠-甲醇、正己烷等) ......