张慧娟，付冰冰，王 静

    (北京工商大学食品与健康学院 中国-加拿大食品营养与健康联合实验室(北京) 北京100048)

    心脑血管疾病是我国乃至全球致死率最高的疾病，而高血脂症则是心脑血管疾病的主要诱因。由于药物的副作用很难消除，很多研究开始侧重于寻求无毒、健康的药物替代品，因此食源性功能成分对人体脂质代谢的调节作用得到越来越多的关注[1]。大豆多肽因其多样的生物功效得到越来越广泛的关注[1-5]。Anderson 等[6]证明人体每天摄入25 g 大豆蛋白，可以降低血清中的低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三酯的含量分别为9.2%，12.9%和0.5%。也有研究表明连续5 周每天摄入20 g 大豆蛋白与80 mg 异黄酮，可以降低中年人患冠心病的发病率[7]；含高植物蛋白的豆奶可以显著降低血清中的胆固醇含量[8]。据报道，大豆蛋白水解物(SPH)具有比完整大豆蛋白更高的体内降胆固醇能力[9]。大豆多肽的制取一般采用单一、多种专一、非专一性蛋白酶水解而得。大豆多肽具有良好的溶解性、吸水性等理化性质，并具有易吸收，降胆固醇，降血压，抗氧化，抗炎等多种生理功能[10]。降胆固醇大豆多肽经大豆蛋白加工处理，一般由3～6 个氨基酸组成[11]。张清明[12]以大豆多肽、谷胱甘肽等制成调节脂质代谢的功能性饮品。此外Zhong等[13]以喂食高脂饲料的小鼠为动物模型，探究了大豆蛋白酶解产物调节脂质代谢的生物活性，且进一步研究表明源于大豆蛋白的多肽WGAPVT(WT-6)和WGAPSL(WL-6)具有体外降胆固醇的生物活性；也有研究表明利用多肽LPVPR(LR-5)灌胃小鼠2 d 后，可以降低小鼠体内的总胆固醇和低密度脂蛋白含量[14]，而利用大豆多肽VAWWMY(VY-6)灌胃大鼠1 h 后，表现出抑制胆固醇在大鼠小肠、肝脏及血清中吸收的能力[15]。活性多肽的生物利用度是活性多肽进一步开发利用的限制性因素[16]，因此利用Caco-2 细胞模型探究多肽的转运和吸收机制也得到了越来越广泛的关注[17]。

    本研究以具有降胆固醇生物活性的3 种大豆多肽WL-6、VY-6 和LR-5 为研究对象，探究其在Caco-2 细胞模型中抑制胆固醇吸收的生物活性以及转运吸收机制，以期为活性多肽的转运吸收机制提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    人源肠Caco-2 细胞，北京协和医院；多肽VY-6、LR-5、WL-6、WT-6，紫域多肽合成有限公司；DMEM 培养基、MEM 培养基、PBS 缓冲液、青霉素-链霉素、胰蛋白酶、非必需氨基酸、HEPES缓冲液 ......