李亚会，李积华，吉宏武，周 伟，陆旭丽

    (1 中国热带农业科学院农产品加工研究所 农业农村部热带作物产品加工重点实验室 广东湛江524001 2 广东海洋大学食品科技学院 广东湛江524088)

    人体与外界长期接触，如呼吸、外界污染、辐射等因素不断在体内产生自由基，过量的自由基会引起细胞内氧化还原反应失调，导致氧化应激的发生，造成生物大分子的氧化损伤。抗氧化物能缓解自由基对机体造成的损伤。近几年，人们关注更多的天然抗氧化物质，如从鸡蛋[1]、玉米[2]、大豆[3]及牛奶[4]等蛋白质酶解产物中得到的抗氧化活性肽，表现出较强的抗氧化活性。此外，水产品包括蛤[2]、鱿鱼[5]、虾[6]等蛋白酶解产物也是非常好的抗氧化活性肽的来源。

    远东拟沙丁鱼属于南海低值鱼资源，具有分布广、生长快、繁殖力强的特点，其营养丰富，价格低廉[7]。前期研究结果显示远东拟沙丁鱼酶解液中的蛋白多肽具有较强的抗氧化活性[8]，其氨基酸营养丰富，具有抗疲劳，抗免疫，改善皮肤等诸多优点。然而因其粗肽成分复杂，如含有未酶解的蛋白质，分子质量不同的肽段，小分子氨基酸，盐离子等成分，故影响肽的抗氧化活性。进一步分离纯化远东拟沙丁鱼蛋白粗肽，可获得纯度更高，活性强的产物。

    目前最常用的分离纯化方法有凝胶过滤、离子交换层析、高效液相色谱等分离方法。本研究以分离组分的抗氧化活性及分离效果为指标，结合快流速Q 琼脂糖凝胶(Q-Sepharose Fast Flow-QFF)和反相色谱柱YMC-pack-OSD-AQ 色谱的分离方法，对远东拟沙丁鱼蛋白多肽进行逐级分离。通过微量质谱法，采用轨道阱液相质谱联用仪测定功能肽段的氨基酸序列，最后进行鉴定和解析。为探索鱼蛋白肽相关功效物质提供理论基础数据。

    1 材料与方法

    1.1 材料和试剂

    福林酚试剂盒，美国Sigma 公司；快流速Q琼脂糖凝胶(Q-Sepharose Fast Flow)，美国GE公司；乙腈、甲醇、乙醇(色谱级)，美国Sigma 公司；反相C18 色谱柱(YMC-pack-OSD-AQ)，美国GE 公司。

    1.2 仪器与设备

    AKTA-prime 蛋白质纯化仪，美国GE 公司；多功能酶标仪，美国Thermo 公司；LC1200 液相色谱仪，美国安捷伦公司；Waters e2695 高效液相，美国沃特世公司；LC-MS，美国Thermo 公司；恒温水浴振荡器(SHA-82A)，深化生物技术有限公司(广州)；真空冷冻干燥机(FDU-1100) ......