汤 纯，刘 芳，诸永志，吴海虹，孙芝兰

    (江苏省农业科学院农产品加工研究所 南京210014)

    克氏原螯虾俗称小龙虾(Procambarus clarkii)，原产于北美洲地区[1]，上世纪20年代由日本传入我国，现广泛分布于我国长江中、下游地区，已成为重要经济虾类。本世纪初，小龙虾产业迅猛发展，2017年全国小龙虾养殖总产量达112.97 万t[2]，然而，相关食品卫生问题频频发生。2010年，南京部分地区医院急诊科陆续接诊了多个因食用小龙虾患横纹肌溶解症的病人[3]；江西瑞昌、湖北十堰等地先后出现副溶血性弧菌(V.parahemolyticus)集体性食物中毒事件[4-5]。小龙虾营养丰富且主要生活在水体环境中，因此，生鲜小龙虾自身携带多种微生物，极不耐运输储藏[6-8]。张生元等[9]和朱若林等[10]从安徽肥东某养殖场的濒死虾中分离到布氏柠檬酸杆菌。李兵兵等[11]在淮安地区发现当地鲜活小龙虾携带副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等致病菌。

    传统培养基分离鉴定法是利用各类具有选择性的固体培养基对样品处理液中的细菌进行计数、分离，而后提取、扩增DNA，通过NCBI Blast分析DNA 序列，确定菌株类别[12]。此方法在实施过程中人为主观意识较强，仅凭视觉挑选单菌落，容易遗漏腐败菌。此外，传统平板培养基不能毫无遗漏地培养出样品携带的全部细菌，自然环境中可通过此方法培养得到的细菌仅占1%[13-14]。宏基因组测序法可以弥补这一不足，它能对数10 万条DNA 同时测序，针对性地分析样品所携带菌群的基因组[15]。邓晓影等[16]和江艳华等[17]分别利用宏基因组测序法全面分析南美白对虾、虾夷扇贝柱的菌群多样性。江杨阳等[18]采用上述2 种方法探寻小龙虾低温保藏时的腐败菌，得出宏基因组测序法结果的菌群多样性更高。

    小龙虾好温喜湿，不同产地的地理条件、养殖环境与饲料不尽相同，因此在研究其所携带菌群时，需结合多个因素综合考虑[19]。本研究采用传统培养以及宏基因组测序法，选择浦口和太湖东山产区的小龙虾，分析鲜活小龙虾整体、表面及尾肉部位的菌群组成，归纳其携带的污染菌，为小龙虾的保鲜、运输研究提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    小龙虾来源于浦口、太湖东山，冷鲜包装后由顺丰快递寄至实验室备用。

    PCA 菌落计数培养基、BHI 脑心浸液肉汤、结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)、甘露醇氯化钠琼脂(MSA)、乳酸菌琼脂基础培养基(MRS)、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)、营养肉汤(NB)、脑心浸出液肉汤(BHI) ......