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编号:39788
氧化石墨烯指数富集法筛选食品中的组胺适配体
http://www.100md.com 2021年3月6日 2021年第2期
组氨酸,配子,1材料与方法,1材料与试剂,2随机文库构建和引物合成,3聚合酶链式反应(PCR)与琼脂糖凝胶电泳,4GO-SELEX筛选方法,5适配体二级结构模拟,6适配体结合特异性分析,7适配体亲和力测定,2结果与讨
     朱勤超,冯俊丽,2*,戴志远,2,汪 艺

    (1 浙江工商大学海洋食品研究院 杭州310012 2 浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室 杭州310012)

    组胺(histamine,HA)是在许多食物(例如葡萄酒、奶酪、蔬菜和鱼类等)中以各种水平存在的一种生物胺(biogenic amine,BA)。大部分由生物胺造成的食源性中毒事件都与组胺有一定联系[1]。低浓度组胺参与重要神经生理功能的调节,如机体运动、体温控制、胆固醇及胆汁酸代谢和免疫反应[2]。然而,食品和饮料中高浓度的组胺对人体具有毒性作用,会引起腹泻、恶心、呕吐、心悸、头疼、心肌缺血和急性肺水肿等症状[3]。在食品加工和储存期间,组胺通常由微生物对环境中游离的组氨酸进行脱羧反应而产生。反应中涉及的外源组氨酸脱羧酶由相关的微生物释放。这些微生物有些存在于活鱼的正常微生物菌群(主要是肠道细菌)中,然而大多数似乎来自渔船上、加工厂和运输系统的污染[4]。除了卫生条件外,食品加工方法的其它因素,如其储存温度和时间对组胺生成也有一定影响。

    值得注意的是,食物中的组胺一旦形成通常不会被高温破坏[5]。食品中组胺的存在及含量非常重要,它通常作为食品变质的一个指标,也是食品生产加工、运输和储存过程中质量控制、监测的生物标志物之一[6]。

    据文献报道,目前鉴定、定量组胺的分析方法有:毛细管电泳技术[7-9]、气相色谱[10-11]、薄层色谱[12]、高效液相色谱[13]、比色法和荧光法[14]等。这些方法成本高,耗时且需要复杂的设备,亟待构建一种操作简便、成本低廉、速度快、灵敏度高的组胺检测方法。

    适配体是由寡核苷酸随机文库通过指数富集筛选而获得。适配体的体外选择过程涉及特异结合,分离和扩增[15-16]。适配体可以靶向多种分子结构,如金属离子、生物毒素、蛋白质、细菌和病毒等[17-19]。适配体折叠成不同的二级结构或三级结构,进而具有与抗体相当的亲和性和特异性,可识别相应目标物质[20]。此外,与抗体相比,适配体具有以下几个优点[21-23]:快速可重复的合成,简单可控的精确修饰,以满足不同分析、临床诊断和治疗。其稳定性好且可逆变性,至今未发现免疫原性,具有较长的保质期。作为抗体替代物,新出现的适配体成为检测特定靶标的理想识别元件,得到国内外科研人员的广泛研究[24] ......

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