王晓萌，甄 妮，田启远，叶聪艳，曾小群*，潘道东，陈小虎

    (1 省部共建农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室 浙江宁波315211 2 浙江省动物蛋白食品精深加工技术重点实验室 宁波大学食品与药学学院 浙江宁波315211)

    嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)作为第3 代乳酸菌发酵剂，广泛用于发酵乳制品、微生态制剂和药物制剂生产中[1]，可缓解乳糖不耐症，抑制肠道中的致病菌，增强免疫力，抑制癌症的发展等[2]。冷冻干燥法是有效保存菌种和制备直投式发酵剂的方法之一，包括预冻、升华、解析3 个过程。菌体的细胞在低温和干燥双重胁迫下，会遭受损伤，从而导致存活率降低[3]。主要有以下几点原因：首先，细胞在冷冻干燥过程中，细胞质内的溶液处于低温环境下，细胞内、外水分冻结而生成冰晶以及复水时产生的重结晶，会对菌体造成物理伤害，丧失正常的生理代谢功能而死亡[4]；其次，细胞膜的结构发生改变，破坏其完整性和流动性，导致生物膜功能丧失，最终使细胞的正常生理代谢发生紊乱[5-8]；同时，冷冻会改变细胞膜的脂质结构，让细胞内、外物质的转换过程失去正常控制[9]。

    当前，针对乳酸菌冻干保护的研究集中在以下4 个方面。第一，添加冻干保护剂，主要包括糖类物质、氨基酸类物质、醇类物质和脱脂乳等[10]；第二，优化菌体生长培养条件，包括优化培养基的组成，调节菌体的生长环境，控制菌体的生长时间，选择合适的菌体培养时间[11]；第三，优化冷冻干燥条件，包括温度及浓缩菌体方式等[12]；第四，胁迫预处理，主要包括冷胁迫和饥饿胁迫等[13]。本试验以嗜酸乳杆菌为模式菌株，优化提高冻干存活率的冷休克预处理条件，并结合复合冻干保护剂，获得一种提高乳酸菌冻干存活率的新方法，为制备活性直投式发酵剂提供理论和技术支持。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    实验室的嗜酸乳杆菌ATCC4356、MRS 肉汤、MRS 琼脂、甘油、葡萄糖、脱脂乳、山梨糖醇、生理盐水、无菌水等。

    1.2 设备及仪器

    LDZX-50KB 立式压力蒸汽灭菌器，上海申安医疗器械厂；离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；JB090312-02 超净工作台，苏州华科净化设备有限公司；SPX-150 37 ℃恒温培养箱，常州华冠仪器制造有限公司；LGJ-10 普通实验型真空冷冻干燥机，北京松源华兴科技发展有限公司；DW-86L828J-80 ℃超低温冰箱，杭州诺丁科学器材。

    1.3 试验方法 ......