范一灵，George C.Paoli，宋明辉，史贤明，杨美成*

    (1 国家药品监督管理局微生物检测技术重点实验室 上海市食品药品检验研究院 上海201203 2 美国农业部农业研究局东部研究中心 美国宾夕法尼亚州19038 3 上海交通大学农业与生物学院 中美食品安全联合研究中心 微生物代谢国家重点实验室 上海200240)

    单核细胞增生李斯特菌 (Listeria monocytogenes)是食品中重要的致病性微生物[1]，也是李斯特菌属内能引起肠胃炎、败血病、脑膜炎和李斯特菌病等最主要的病原体[2-3]，致死率达30%，对免疫缺陷人群危害严重[4]。该菌广泛存在于乳制品、肉制品、蔬菜水果和海产品等各类食品中，能在pH 4.0、高盐和4 ℃环境中存活并繁殖[5-8]。

    单核细胞增生李斯特菌的生长易被其同属内的其它细菌(如英诺克李斯特菌等)掩盖，较难在培养后分离获得目标菌，导致假阴性检测结果[9]。免疫磁珠捕获技术 (Immuno-magnetic beads technology，IMBs)可在复杂体系中特异性地捕获目标微生物，获得活菌体[10-12]。IMBs 的特异性依赖于所用抗体的性能，而抗体受制于生产工艺，其质量与产量都不稳定[11，13]。与传统免疫血清、杂交瘤等抗体制备技术相比，噬菌体展示技术 (phagedisplay techniques)通过噬菌体库与目标菌的特异性结合，筛选获得高特异性的表面单链抗体片段(single-chain antibody fragments，scFvs)[14]。将表达特性蛋白的基因转移至质粒内，可稳定保存并大规模生产具有相同特性的单链抗体。

    前期有研究报道一种对单核细胞增生李斯特菌具有高特异性的噬菌体展示单链抗体片段的制备方法[13，15-16]。本研究基于该片段的特异性，制备亲和素偶联的scFv 免疫磁珠(scFv-IMBs)。通过在多种增菌培养体系中的定性、定量检测，考察scFv-IMBs 对不同李斯特菌属细菌的特异性捕获情况，评价scFv-IMBs 在人工污染的法兰克福香肠中分离单核细胞增生李斯特菌和英诺克李斯特菌的能力。

    1 材料与方法

    1.1 菌株及培养条件

    试验使用了14 株单核细胞增生李斯特菌和9 株其它李斯特菌属细菌(表1)。菌种复苏于脑心浸液(BHI)培养基(BD Diagnostics，Sparks，MD)中，置37 ℃振荡培养过夜，振荡速度为250 r/min。选择RAPID L.Mono Agar(Bio-Rad ......