牡蛎中产广谱细菌素芽孢杆菌的筛选及鉴定
电泳,条带,1材料与方法,1样品,2试验设备与试剂,3试验方法,2结果与讨论,1产细菌素菌株的筛选及鉴定,2细菌素对热和酶的稳定性测试,3重复片段基因指纹分析(rep-PCR)和系统发育树构建,4质粒提取,5细菌素粗提
王 伟,陈渊戈,迟 海*,陶乐仁(1 中国水产科学研究院东海水产研究所 上海200090 2 上海理工大学医疗器械与食品学院 上海200093)
食源性致病菌的污染和增殖是严重威胁食品安全和公共健康的因素之一,成为人们关注的热点问题[1-2]。根据世界卫生组织最新的统计数据,世界上每年有近十分之一的人因食品污染而患病,近42 万人死于食源性疾病[3]。食品添加剂作为延长食品货架期的一种手段,可以抑制食源性致病菌的生长,然而食品添加剂潜在危害及添加剂量成为消费者担忧的问题[4]。同时,抗生素作为主要抑制食源性疾病的源头药物,其长期滥用导致食源性致病菌的耐药性问题愈发严重[5]。鉴于此,研究人员不断寻找天然的防腐剂以及不易产生耐药性的天然抗菌物质作为食品添加剂及抗生素的替代品。
细菌素是细菌核糖体内合成的一类具有抑菌活性的多肽或蛋白类物质,主要对亲缘关系较近的微生物有一定的抑制作用[6]。细菌素具有高效、无毒、稳定性强、无残留以及不易产生抗药性等优点,被普遍认为是抗生素及化学添加剂的替代物之一[7-8]。目前真正用于商业化的乳酸菌细菌素仅有乳酸链球菌素(nisin)和片球菌素(pediocin PA-1)[9]。造成这种现象的原因主要是乳酸菌细菌素的性质(如有些乳酸菌细菌素抑菌谱窄、pH 敏感性及热稳定性差)和分离纯化方法等诸多因素限制了乳酸菌细菌素的获取及其工业化生产[10-11]。筛选具有广谱抑菌作用,pH 耐受范围广,热稳定性好的新型细菌素对食品安全具有重要意义。
芽孢杆菌(Bacillus sp.)作为动植物和微生态的优势菌,不仅种类繁多、稳定性强,而且广泛存在于自然界中[12-13]。由芽孢杆菌中地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)等产生的细菌素也逐步被关注和发现[14-21]。本研究从福建霞浦海域的牡蛎中分离出不同的细菌,并以常见的食源性致病菌:金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡样芽孢杆菌(B.cereus)、副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)等为指示菌,系统筛选具有广谱抑菌作用的产细菌素的细菌。其中分离出具有广谱抑菌活性的14 株细菌经16s rDNA 基因鉴定为芽孢杆菌。这些芽孢杆菌所产的细菌素主要是由核糖体合成,并具有热稳定性和酶敏感性等特点。结合Tricine-SDS-PAGE 电泳试验结果及LC-MS/MS鉴定,潜在细菌素的分子质量范围及对应的氨基酸序列均显示上述广谱细菌素可能未被发现 ......
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