程安玮，张梦迪，王厚伟，孙金月，王新坤，刘 超，王 青，郭 溆

    (1 湖南农业大学食品科学技术学院 长沙410128 2 山东省农业科学院农产品研究所 农业农村部新食品资源加工重点实验室山东省农产品精深加工技术重点实验室 济南250100 3山东中医药大学药学院 济南250355)

    炎症的发生、发展是由众多受体、信号转导通路及转录因子共同参与的复杂反应。炎症介质的生成是高耗能的过程，细胞的能量代谢状态与炎症的发生、发展密切相关[1]。脂肪组织不仅是能量储存的器官，还是重要的内分泌器官。脂肪细胞可分泌多种炎性因子和脂肪因子，这些炎性与脂肪因子的异常分泌将对机体机能产生很大影响。代谢性炎症是由脂肪组织的脂肪细胞和巨噬细胞共同发起和调控的，两者协同的应激反应为炎症的发生和发展提供了一个衔接口。

    研究证明多酚类成分具有明显的抗炎活性，而儿茶素是茶多酚中的主要功效成分，占总量的70%以上。炎性脂肪细胞模型的构建，需要一定剂量的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作为诱导剂。巨噬细胞分泌的TNF-α 可作为炎性脂肪细胞的诱导剂，是否与通过直接添加TNF-α 的作用效果一致？ 本文通过建立巨噬-脂肪细胞共培养体系，基于腺苷酸活化蛋白激酶/组蛋白去乙酰化酶(AMPK/SIRT1)信号通路，研究儿茶素对不同处理组中炎症标志物白介素(IL)与炎性酶基因表达水平的影响，以及对AMPK/SIRT1 磷酸化水平的影响，初步阐明儿茶素的抗炎作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    小鼠3T3-L1 前脂肪细胞 (GDC180)、小鼠RAW264.7 巨噬细胞(No.GDC143)，中国典型培养物保藏中心(武汉大学)。儿茶素标品(纯度≥98%)、胰岛素(Inslulin)、甲基亚砜(DMSO)，Solarbio 公司(北京)；小牛血清(FCS)，Gibco 公司；胎牛血清(FBS)、DMEM 高糖培养基、青链霉素、胰蛋白酶、地塞米松(DEX)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)、TNF-α，Sigma 公司(美国)；PBS 缓冲液，Hyclone 公司(美国)；EASYspin Plus 组织/细胞RNA 快速提取试剂盒，昊鑫生物公司；第一链cDNA 合成试剂盒、定量PCR 试剂(Rox)，南京Vazyme 公司；RIPA 裂解液，碧云天公司；BCA 蛋白定量试剂盒，艾德莱公司；AMPK(Thr172)抗体、AMPKα 抗体、Sirt 1(Ser27)抗体、Sirt1 抗体，美国Abconal 公司 ......