张建旭，王璐颖，郑晓卫，李 宁，孙纪录*，桑亚新

    (1 河北农业大学食品科技学院 河北保定071001 2 中粮营养健康研究院有限公司 营养健康与食品安全北京市重点实验室 北京102209)

    壳聚糖在农业、食品工业、生物医药等多个领域应用广泛[1-2]。几丁质脱乙酰酶(Chitin deacetylase，CDA)是催化水解几丁质中的乙酰基，使几丁质转化壳聚糖的一组酶[3]。酶法生产壳聚糖绿色环保，是该行业未来的一个重要发展方向[4]。由CDA处理几丁质得到的壳聚糖脱乙酰度高，产品质量稳定[5]。然而，CDA 直接作用于几丁质效率低，酶活力不高等，限制其在实际生产中的使用[6]。近期的研究表明，CDA 对经处理破坏晶体型态后形成的无定形、胶体或超细几丁质能发挥出较大的酶活性[7-8]。目前，国内外对CDA 的研究大都集中在高产菌株选育，产酶工艺条件优化，酶学特性，酶的结构以及CDA 对底物的催化机理等方面[4]，尚未有利用小龙虾壳作为培养基优化产酶的报道。

    我国小龙虾产量丰富，消费量大，副产物小龙虾壳数量巨大。将小龙虾壳回收利用，有利于资源利用和环境保护[9]。小龙虾壳中含有丰富的蛋白质[10-11]，可为红球菌生长提供营养，然而，其与几丁质和碳酸钙紧密结合[12]，不利于微生物的利用。理论上，通过一定的预处理，可使虾壳中的蛋白质脱落分散，从而有利于红球菌的利用[11]。目前报道的红球菌产CDA 发酵培养基往往成本较高[13]。本研究拟利用小龙虾壳粉作为主要原料，通过预处理和适量补加成分，研发红球菌高产CDA 的新型培养基，并优化其它培养条件，以期降低CDA 的生产成本，从而降低酶法生产壳聚糖的成本。

    1 材料与方法

    1.1 菌种

    红球菌(Rhodococcus sp.)菌株11-3[14]，山东省食品发酵工业研究设计院食品发酵工程重点实验室惠赠。

    1.2 主要原料、试剂和培养基

    小龙虾壳粉：小龙虾，保定市农产品批发市场。清洗虾壳，然后于电热鼓风干燥器中60 ℃干燥至恒重。将烘干的虾壳粉碎，过120 目筛，制得虾壳粉。

    主要试剂：碱性蛋白酶，北京索莱宝科技有限公司；蔗糖、硫酸铵，国药集团化学试剂有限公司；玉米浆，华北制药康欣有限公司；对硝基苯胺，天津市华东试剂厂；对硝基乙酰苯胺，上海源叶生物有限公司；除玉米浆为生化试剂外，其它均为分析纯级试剂。

    培养基：NB 培养基，用于红球菌的活化。

    1.3 主要仪器与设备 ......