王晶波，杨 倬，秦 文，王丽媛，陈 曦，卓 勤，宫照龙，沈 葹

    寻找和开发安全性高、天然、无毒的抗氧化物质是近几十年来功能性食品研究的热点[1]。选择恰当准确的评价方法来评价其抗氧化活性至关重要。抗氧化活性评价方法主要包括体内动物试验、体外化学评价方法和细胞抗氧化评价方法。体内动物试验[2-3]是评价抗氧化活性较好的方法，然而，其成本高、周期长，不适于大批量样品的初筛操作；体外化学评价方法包括1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2，2'-联氮双-(3-乙基苯并噻唑林-6-磺酸)二胺盐(ABTS)和氧化自由基吸收能力(oxygen radical absorbance capacity，ORAC)等[4-8]，具有成本低、检测快、结果稳定等优点，然而，化学评价方法仅关注食物的抗氧化值，未考虑抗氧化成分在细胞内的生物利用率、吸收和代谢等情况，因此不能反映细胞生理条件和作用机制。

    细胞抗氧化评价方法能够反映抗氧化物质在细胞内的吸收、代谢和分布等情况，相比于体内试验和体外化学评价方法，具有准确、用时少、成本低的特点[9]，是目前评价抗氧化物质的一种相对科学、合理的方法。Wolfe 等[10]建立的细胞抗氧化活性(cellular antioxidant activity，CAA)评价方法是以人体肝癌细胞HepG2 为试验模型，观察抗氧化物质在细胞中的反应情况，继其之后，许多研究小组建立了其它细胞模型(如Caco-2、AGS、RBC)[11-13]的抗氧化活性评价方法，丰富和创新了细胞抗氧化评价方法。同时，也有研究者发现不同的细胞模型适用于不同的抗氧化物质的活性检测[14]，因此，对细胞抗氧化评价方法的细胞模型的筛选是必不可少的。

    牛肝菌是一种食药兼用的大型真菌，富含多酚、多糖、萜类[15-16]等抗氧化活性物质。目前评价牛肝菌多酚抗氧化活性的研究多集中在体外化学评价法。本文采用氧化自由基吸收能力和细胞抗氧化评价方法综合评价牛肝菌多酚的抗氧化活性，比较Caco-2、L02 和HepG2 3 种细胞模型检测多酚浓度范围、灵敏度方面的差异，确定能准确评价牛肝菌多酚抗氧化活性的细胞评价模型，为抗氧化物质的活性评价方法提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要样品、试剂与仪器

    野生牛肝菌干货样品(市售)分别购自云南不同产地，将样品粉碎，过120 目筛后置阴凉干燥处备用。3 种牛肝菌名称(产地)分别为红牛肝菌(普洱)、黄牛肝菌(大姚)、黑牛肝菌(师宗)，设为样品1～3 号。

    Caco-2 和L02(编号为FH0029 和FH0099) ......