陈忠军，张钰皎，胡炜东，孙子羽，苏 杰，满都拉*

    金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enterica)和大肠杆菌(Escherichia coli)是主要的食源性病原菌，它们极易在食品加工过程中形成混合菌生物被膜。混合菌生物被膜是自然界多种微生物为适应胁迫环境，通过分泌胞外多糖等基质而形成的有利于生存的微生物集落。混合菌生物被膜更难以被清除，从而导致食品腐败等食品安全性问题[1-3]。金黄色葡萄球菌是一种常见的人、畜共患病病原菌，不仅会造成细菌性食物中毒，还会对食品加工人员造成危害[4]。金黄色葡萄球菌的致病性主要与其分泌的多种毒素因子有关，包括肠毒素(Staphylococcal enterotoxins，SEs)、黏附素(Adhesion factors)、溶血素(hemolysin，HL)、杀白细胞素(Panton-Valentine leucocidin，PVL)、脱皮毒素(Exfoliatives，ETs)、中毒性休克综合征毒素(toxic shock syndrome toxin，TSST)和凝固酶(Coagulase，CaL)等[5-8]。

    本文对食源性混合病原菌生物被膜(金黄色葡萄球菌-大肠杆菌-沙门氏菌)进行定性和定量检测，以其中优势菌(金黄色葡萄球菌)为研究对象，通过对其特有的28 种目的毒素基因的定量，计算单一菌和混合菌生物被膜中金黄色葡萄球菌特有毒素基因转录水平的差异，旨在进一步分析生物被膜中金黄色葡萄球菌的致病性，并为其有效防治提供依据。

    1 材料与设备

    1.1 材料

    金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC 26003-3、大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 11775-3、肠炎沙门氏菌(Salmonella enterica)ATCC 14028，中国普通微生物菌种保藏管理中心；结晶紫、氯化钠、0.1mol/L PBS、草酸铵、甲醇、冰醋酸，上海国药集团化学试剂有限公司；Trizol试剂，天根生化科技(北京)有限公司；Prime-ScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser、SYBR?Premix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus)，ROX plus、DL2000 DNA Marker，TaKaRa(宝生物)；胰蛋白胨大豆肉汤培养基(Tryptone Soy Broth，TSB)，北京陆桥生物技术有限公司 ......