姚利利，席 俊，陈慧彬，陈 阳，皮江一，李 潘

    大豆是人类食物过敏源之一[1]。调查表明，一般人群的大豆过敏患病率可能高达0.5%，而儿童高达13%[2]。据报道，至少有19 种大豆蛋白与大豆过敏患者的人血清IgE 结合，其中包含大豆球蛋白。大豆球蛋白结构复杂，为六聚体结构(两层三聚体组成)，三聚体内部各多肽链通过二硫键和氢键配对交替连接在一起[3]。大豆球蛋白(Gly m 6)的变应原特性被广泛描述[4]。研究发现86%大豆过敏的患者的IgE 与Gly m 6(大豆球蛋白)结合[5]。关于大豆过敏蛋白的致敏表位鉴定一直是国内外学者研究的热点，而纯度高的目标抗体更有利于筛选和鉴定抗原表位。层析法和非层析法常用于抗体的纯化，一般非层析法后再进行层析纯化[6]。效果较佳的硫酸铵沉淀法为非层析法之一，收率达91%[7]。免疫亲和层析利用抗体和抗原的相互作用来纯化抗体[8]。该方法被用来促进低致敏性产品的开发[9-10]。抗原或者抗体偶联在柱填料上，具有高度选择性和较好的纯化效果[11-12]。本试验将大豆球蛋白偶联在免疫亲和层析柱填料上作为配基，进样的抗血清提前经硫酸铵沉淀，待目标抗体与大豆球蛋白充分反应吸收后洗脱2 次。首次非特异性洗脱物主要为其它非特异性抗体和杂蛋白，经特异性洗脱的为目标抗体。该亲和层析具有纯化过程简单、快速、产品纯度高等优点。该方法的应用将有利于大豆球蛋白过敏原的深入研究。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    大豆球蛋白、抗大豆球蛋白多抗血清，实验室自制；CNBr activities sephrose 4B(免疫亲和层析柱)，美国GE 公司；亲和层析柱、HRP 标记羊抗兔IgG、0.45 μm 滤膜，北京索莱宝科技有限公司；紫外检测仪，上海青浦沪西仪器厂；Multiskan 酶标仪、Nanodrop ND-2000 超微量核酸蛋白测定仪，美国Thermo 公司。

    1.2 试剂配制

    试剂的配制参照文献[13] ......