苯并芘诱导Balb/c小鼠的生理损伤和肠道菌群失调
试剂盒,1材料与方法,1材料与试剂,2仪器与设备,3动物实验设计,4血液生化指标测定,5氧化还原指标测定,6小鼠粪便微生物总DNA的提取和肠道菌群高通量测序,7统计与分析,2结果与分析,1苯并芘暴露对小鼠体重
于雷雷,张凌宇,张 灏,翟齐啸,田丰伟,陈 卫(江南大学食品学院 江苏无锡 214122)
食品在熏制和烘烤过程中,会产生大量的多环芳烃(Polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs),危害人体健康[1-2]。其中,苯并芘是多环芳烃中最具特征和毒性的成员[3],在水、大气和土壤[3-5]中广泛存在。据Phillips[6]报道苯并芘的摄入主要来自食品,尤其是加工不当的木炭烧烤食品。国际癌症研究机构(International agency for research on cancer,IARC)已将苯并芘归为人类Ⅰ类致癌物,其主要损伤机制是通过产生活性氧(Reactive oxygen species,ROS)诱导氧化应激和DNA 损伤。苯并芘本身毒性不大,然而,当其被细胞酶系P450 代谢时,可转化为具有高度致癌性的物质7,8-二羟-9,10-环氧苯并芘(7,8-dihydroxybenzopyrene-9,10-oxide,BPDE),其与DNA 结合会对人体造成严重损害。
暴露不同剂量的外源化合物对机体的损害程度也不同。苯并芘是一种在体内反应较为复杂的化合物,关于苯并芘单一剂量对生物体损害的研究很多,并在动物模型中证实其可诱发肺癌和结肠癌[7-10],对人类造成遗传毒性。苯并芘对脑、肺和结肠的氧化应激也有报道[11-12]。通过饮食暴露苯并芘必定会对肠道菌群产生不利影响。肠道菌群在调节宿主健康中起着重要作用[13],其产生的丙酸和丁酸可以很好地抑制炎症[14-16]。然而,关于苯并芘对肠道菌群的影响鲜有研究报道。此外,苯并芘对生物体损害的剂量效应研究较少,因此研究二者的关系具有重要意义。
本研究选择不同苯并芘暴露剂量,研究其对Balb/c 小鼠造成生理损伤剂量效应关系,并探究其损伤机制是否导致肠道菌群失调。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
总超氧化物歧化酶(SOD) 试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、总胆固醇(TC)试剂盒、总蛋白含量(TP)试剂盒、甘油三酸酯(TG)试剂盒、高密度脂蛋白(HDL)试剂盒、低密度脂蛋白(LDL)试剂盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒、天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒、丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒,南京建成生物研究所;苯并芘,美国Sigma 公司;FastDNA Spin Kit for Feces 细菌基因组提取试剂盒,美国MPbio 公司;TIANgel Mini Purification Kit 试剂盒 ......
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