赵 佳，姜 波，郭建丽，张丹洋，孙文辉，包永明，3*

    (1 大连理工大学生物工程学院 辽宁大连116024 2 大连理工大学盘锦产业技术研究院 辽宁盘锦124221 3 大连理工大学海洋科学与技术学院 辽宁盘锦124221

    骨质疏松症是一种常见的代谢性骨病[1]。世界卫生组织在2015年提出的《关于老龄化与健康的全球报告》指出，在国家和全球层面上需要重新和持续关注改善肌肉骨骼健康[2]。骨重建过程取决于维持成骨细胞形成骨基质与破骨细胞消除骨矿化之间的平衡。成骨细胞响应骨细胞产生的信号，并将破骨细胞前体募集到重塑部位，然后，通过骨保护素(OPG)/核因子κB 配体受体激活剂(RANKL)/核因子κB 受体激活剂(RANK)系统的受体激活剂，成骨细胞可调节破骨细胞的生成[3]。

    骨质疏松症主要是体内维生素D 缺乏，钙摄入量不足以及雌激素下降引起的。目前，人们普遍接受雌激素替代疗法用于治疗因缺乏雌激素的骨质疏松症患者。然而其有副作用，尤其是增加乳腺癌的风险[4]。维生素D3(Vitamin D3，VD3)是骨形成系统中的重要参与者，在钙稳态中具有增加钙从肠道吸收的功能[5]。饮食中摄入足够的维生素D3是必要的，其广泛存在于油性鱼和鳕鱼肝油中[6-7]。染料木素(Genistein，Gen)是常见的异黄酮植物雌激素化合物之一，在大豆中的含量丰富[8]，也是可食用的天然物质，能够有效降低副作用。

    目前已有大量从细胞及动物水平上研究关于维生素D3或者染料木素对骨质疏松症的影响[5，9]。维生素D3及染料木素在促进成骨细胞的分化过程中存在协同作用[10]，协同诱导成骨细胞活化并阻止破骨细胞的分化[11]。适当剂量的染料木素与钙和维生素D3结合被视为预防和管理骨质流失的一种新的潜在疗法[12]。

    本文在细胞水平上验证维生素D3和染料木素对治疗骨质疏松症的协同作用，并研究维生素D3和染料木素在破骨细胞形成中的作用，为通过维生素D3治疗骨质疏松症提供试验依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    小鼠巨噬细胞RAW264.7、人成骨肉瘤细胞MG-63，均购自中国科学院上海细胞库。

    DMEM 培养基(无酚红)、Trizol 试剂、胰蛋白酶，上海生工生物有限公司；Western 及IP 细胞裂解液，碧云天生物技术；染料木素、维生素D3，维克奇生物技术有限公司；二甲基亚砜(DMSO)，美国Sigma-Aldrich 公司；抗坏血酸、茜素红S 染色液(1%，pH 4.2)、西吡氯铵(CPC)、β-甘油磷酸钠 ......