离子色谱法测定母乳和牛乳中的N-乙酰神经氨酸
游离态,中总,唾液酸,1材料与方法,1样品,2试剂与仪器,3离子色谱测定条件,4样品预处理,5统计分析,2结果,1标准曲线的线性范围,2检出限及定量限,3精密度与回收率,4母乳及牛乳中的应用,3讨论,4结论
刘 爽,陈 磊,Philip Haselberger,田 芳,蔡小堃,毛颖异,王 津,赵艳荣*,王 硕*(1 南开大学医学院 天津市食品科学与健康重点实验室 天津300350 2 雅培营养中国研发中心 上海200233 3 雅培营养品 美国哥伦布OH43219)
唾液酸(sialic acid,SA)是一类九碳糖的酰基衍生物,骨架由一分子丙酮酸和一分子甘露糖胺组成,现已发现60 多种唾液酸结构[1]。唾液酸大量存在于中枢神经系统中,是大脑中神经节苷脂和多聚唾液酸链的重要成分,参与修饰神经细胞黏附分子,在细胞间交流、神经元分支、修饰突触连接和记忆形成方面发挥重要作用[2]。动物试验表明,膳食中添加唾液酸,可增加大脑额叶皮质中唾液酸的含量,提高与学习相关的两个基因的表达,此外,唾液酸还参与抑制病原体在肠道上皮细胞上的黏附,其机制是作为肠道中的诱饵受体与细菌和病毒结合,阻止病原体在肠道中的附着[3-4]。
N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acids,Neu5Ac)是唾液酸家族中最主要的物质之一,在母乳中也仅检测到Neu5Ac 结构的唾液酸[5-6]。Neu5Ac 广泛存在于母乳及动物乳汁中,主要以结合态存在。母乳中的大部分Neu5Ac 结合到低聚糖(73%)和糖蛋白上(24%),少部分与糖脂结合或以游离态存在(3%)。牛乳中Neu5Ac 的分布鲜有研究报道。而以牛乳为基质的婴幼儿配方粉中,低聚糖和糖蛋白结合态的比例分别为28%和70%,仅2%与糖脂结合或以游离态存在[7]。准确测定不同泌乳阶段的母乳中Neu5Ac 含量,有助于进一步研究其在婴幼儿体内发挥的生理作用以及婴幼儿Neu5Ac 适宜摄入量的标准。通过对比两种乳汁中Neu5Ac 含量差距,为其在婴幼儿配方粉中的应用提供科学依据。
目前,测定乳汁中Neu5Ac 的方法主要有:分光光度法(spectrophotometric method)[8-9]、液相色谱法(liquid chromatography,LC)[6,10]、液相色谱-质谱联用法(liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS)[11-12]和离子色谱法(ion chromatography,IC)[13-14]。传统的分光光度法灵敏度较低,无法区分不同结构的唾液酸,近年来应用很少。采用液相色谱法测定Neu5Ac 时,因Neu5Ac自身不存在发光基团,故需对其衍生处理。衍生增加了检测的特异性和信号强度,也增加了样品处理的复杂性和潜在的干扰因素 ......
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