赵喆禛，王梦雅，薛 娇，张嘉铭，刘 萍

    (中国农业大学食品科学与营养工程学院 北京100083)

    桦褐孔菌(Inonotus obliquus)是一种珍稀的药用真菌，属担子菌亚门、层菌纲、多孔菌目[1]。桦褐孔菌多糖是桦褐孔菌中的主要化学物质，具有抗氧化、抗肿瘤及免疫调节等活性功能，在糖尿病防治方面受到越来越多关注[2-7]。

    由于野生桦褐孔菌子实体在自然生长状态下要经10～15年才能具有药用价值，资源非常有限，无法满足人们日益增长的需求，因此解决桦褐孔菌资源短缺问题迫在眉睫。液体深层发酵法培养桦褐孔菌具有周期短、产量高、价格低的优势，被广泛使用。目前，对液体深层培养的研究大多集中在如何提高代谢产物产量上，对于如何提高其活性的研究不多，而液体发酵桦褐孔菌产生的代谢产物活性与天然生长子实体中的相比还存在一定差距。近年研究表明，添加刺激因子能改变次生代谢途径中催化酶的活性，从而达到提高次级代谢产物产量和活性的目的[8-9]。桦褐孔菌通过寄生在桦树皮上进行自身生长繁殖，桦树皮中含有多种营养成分，能够确保桦褐孔菌生长及合成生物活性物质。采用高效液相色谱方法研究桦树汁液的营养物质，发现白桦液中含有近70 种化合物，主要包括各种维生素、氨基酸、脂肪酸和矿物质元素等[10]。Wang 等[11]研究发现添加桦树皮水提取物(0.01 g/L)能够刺激液体深层培养的桦褐孔菌菌丝体生长，且其产生的类固醇产量达(225.5±8.7)mg/L，比对照组高97.0%，说明白桦树皮的提取物可作为桦褐孔菌类固醇生物合成的诱导剂。

    II 型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM)又称非胰岛素依赖型糖尿病，其重要发病机制之一为胰岛素抵抗(Insulin resisitance，IR)[12-13]。HepG2 细胞被广泛用作胰岛素抵抗发病机制和糖尿病治疗药物作用机制的体外研究细胞模型[14]。本试验通过探究不同刺激因子(桦树浸提汁、VB1、VB6和白桦脂醇)作用下桦褐孔菌液体深层发酵产生的胞外多糖对HepG2 细胞及胰岛素抵抗HepG2 细胞(IR-HepG2)葡萄糖消耗量的影响，确定导致桦褐孔菌液体深层发酵与子实体多糖降血糖活性差异的主要刺激因子，为桦褐孔菌降血糖保健食品的研发提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料、试剂与仪器

    1.1.1 材料 桦褐孔菌菌种购于四川省绵阳市食用菌研究所，HepG2 肝癌细胞株购于北京博奥森生物公司。

    1.1.2 试剂 DMEM 培养基、胰蛋白酶消化液 ......