杨 聪， 郭丽琼， 叶志伟， 邹 苑， 余颖豪， 林俊芳*

    (1 华南农业大学食品学院生物工程系 广州510640 2 广东省微生态制剂工程技术研究中心 广州510640)

    虫草菌是我国传统医药用真菌， 属于大型药食同源真菌。 蛹虫草【Cordycepsmilitaris (Vuill.)Fr.】，又名迷力菌、虫草花，是麦角菌科(Clavicipitaceae)虫草属(Cordyceps)的模式种[1]，富含虫草素、虫草多糖、甾醇等对人体有益的活性物质及微量元素，具多种抗性，有免疫调节活性[2]。蛹虫草在卫生部2009年底3 号公告中被正式批准为新资源食品，在2014年被纳入新食品原料[3]。

    谷氨酰胺转胺酶(又称转谷氨酰胺酶)是一种天然蛋白质交联剂， 能催化蛋白质中谷氨酰胺残基的γ-羟胺基团与伯胺化合物(酰基受体)之间发生酰基转移反应，使蛋白质发生共价交联，通过胺的导入、 交联及脱胺3 种途径对蛋白质进行改性[4]，被誉为“21 世纪超级黏合剂”。 该酶广泛存在于生物界中， 来源于微生物的TGase(Microbial transglutaminase， MTG)属胞外酶，底物特异性低，在无Ca2+存在的条件下仍有催化活性[5]，工业上主要通过微生物发酵制备，原料廉价、周期短，利于大规模工业制备， 用于食品工业改善蛋白质功能性质。 目前MTGase 最主要的微生物来源是链霉菌属，如茂源链霉菌、吸水链霉菌等，然而链霉菌来源的MTGase 在食品工业中应用的安全性有待考证，尚有争议。从大型食用真菌虫草属的蛹虫草CM01 中获取，其来源是食用真菌，食品安全性得到保证。 目前MTGase 的食用真菌来源只有香菇[6]。 近年来，对TGase 研究集中在应用领域的拓展及对TGase 进行基因改造， 用重组表达系统来实现酶的高表达。

    巴斯德毕赤酵母，是甲醇营养型酵母，以甲醇为唯一碳源，有良好的基因遗传稳定性，翻译后修饰能力，自身蛋白分泌较少，外源蛋白是其发酵液中主要蛋白，分离纯化简单等[7]。 甲基营养型酵母毕赤酵母(Pichia pastoris)是近20年发展起来的一种异源蛋白表达的首选系统[8]，已具有成熟的高密度培养技术。 近年来用重组表达系统来生产TGase 成为工业化生产的主要方式， 应用最为成功的表达系统有大肠杆菌表达系统[9]、棒杆菌表达系统[10-11]和甲基营养型酵母表达系统[12]。 本文所用毕赤酵母GS115 就是甲基营养型酵母， 毕赤酵母不仅可以做到外源蛋白的高表达、高分泌，而且其工程菌株稳定性高 ......