张 雯， 王明钰， 尤静观， 倪 莉

    (福州大学 食品科学技术研究所 福州350108)

    冠突散囊菌(Eurotiumcristatum)是发菌科散囊菌属的一种益生真菌，俗称“金花”菌，是茯砖茶“发花”过程中的优势菌。 目前报道的散囊菌属真菌在生长代谢过程中会产生多种次级代谢产物，被认为有抑菌活性[1-5]。 冠突散囊菌在茯砖茶中生长，该过程中会产生具有抑菌活性的代谢产物，抑制其它微生物的生长， 并大量的繁殖成为优势菌[6]。从黑茶中分离得到的冠突散囊菌发酵液的乙酸乙酯提取物， 对枯草芽孢杆菌和白色链球菌具有抑菌性， 且有良好的热稳定性和酸碱稳定性[7]。Du 等[8]从冠突散囊菌EN-220 中分离得到多种芳香族糖苷，对大肠杆菌具有抑制活性。

    本课题组在前期研究中分离得到1 株冠突散囊菌FS-10， 其发酵滤液对鱼源腐败菌具有明显的抑制作用。为此，本研究采用响应面法优化冠突散囊菌FS-10 产抑菌活性物质的液体发酵培养基；采用高效液相色谱(HPLC)、基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和傅里叶红外光谱(FT-IR)对冠突散囊菌FS-10 发酵液中的抑菌活性物质进行分离纯化和鉴定。

    1 材料与方法

    1.1 试验用菌和培养

    1.1.1 供试菌株 冠突散囊菌(E. cristatum)FS-10，保藏于福州大学食品科学技术研究所；食源性腐败菌，包括嗜冷菌(Psychrophile)DHY-1，希瓦氏菌(Shewanella spp.)JC-20、HC-44、R3-2，假单胞菌(Pseudomonas spp.)LP-3、LP-6，分离自大黄鱼鱼肉与鱼肠， 保藏于福州大学食品科学技术研究所。

    1.1.2 菌体培养 抑菌活性测定用菌液体培养。用无菌接种环取1 环供测菌， 接入牛肉膏蛋白胨液体培养基(牛肉膏0.5 g，氯化钠0.5 g，蛋白胨1 g，蒸馏水定容100 mL，pH 7.0～7.2，121 ℃、高压灭菌30 min)， 于恒温振荡培养箱中30 ℃，200 r/min培养24 h，将菌液稀释至1 000 倍，得到浓度约为1×105CFU/mL 的供测菌菌悬液，备用。

    冠突散囊菌菌株FS-10 发酵无菌上清液的制备方法：采用菌块接种法制备发酵上清液[9]。 将菌株FS-10 在马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)(马铃薯200 g，无水葡萄糖20 g，琼脂20 g，蒸馏水1 000 mL，pH 自然)平板上培养7 d，取1 个直径为8 mm 的菌块接入马铃薯葡萄糖液体 (PDL)培养基中 ......