陈 林，吴 蓓，陈鸿平，王 福，胡 媛，刘友平

    (成都中医药大学药学院 中药标准化教育部重点实验室 西部特色中药资源——省部共建国家重点实验室 成都 611137)

    陈皮为芸香科植物橘(Citrus reticulata Blanco)及其栽培变种的干燥成熟果皮，具有理气健脾，燥湿化痰之功[1]。其入药历史悠久，始载于《神农本草经》[2]，原名“橘柚”，为常用的药食两用品。《本草经集注》以其“陈久者良”[4]，之后医家以橘皮久藏能温、能行，至《食疗本草》[3]始有“陈皮”之名，沿用至今，流通药材分为“陈皮”与“广陈皮”。现代研究，学者多从贮藏条件[5]、环境因子[6]等各方面探究陈皮陈化机制，并通过对陈皮中真菌的分析进一步探究陈皮的药效物质基础。项目组前期研究了3，5，10年广陈皮优势菌落，常见、稀有菌群[7]，发现广陈皮表面真菌群落与湿度、水分、温度、总黄酮、多糖含量密切相关。尝试将黑曲霉反接陈皮，结果发现黄酮类成分含量均增加，抗氧化和祛痰作用增强，与仓储5年陈皮功效相当。提示广陈皮表面微生物可引起药效物质的改变。研究广陈皮微生物分布，于广陈皮质量控制具有重要意义。

    本文以标准仓贮0，1，2，3，4，5，10，15，30年的广陈皮为研究对象，通过Illumina HiSeq 测序平台，分析不同贮藏年限广陈皮真菌与细菌群落的差异，以及微生物群落变化规律，为广陈皮质量控制提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 试验仪器与试剂

    PTC200PCR 仪，美国BIO-Rad 公司；DYY-8C 电泳仪，北京六一仪器厂；2×Taq PCR Master-Mix (Tiangen Biotech Co.，China)；QIAquick 胶回收试剂盒，QIAGEN 公司；HiSeq 2500 测序系统，Illumina 公司；建库试剂盒TruSeq?DNA PCR-Free Sample Preparation Kit，Illumina 公司。

    1.2 试验材料

    不同贮藏年限标准仓储广陈皮均购于江门市新会陈皮村市场股份有限公司，经成都中医药大学鉴定为茶枝柑，见表1。标准仓储为产地原位仓储，季节性定期管理，并记录仓储温湿度变化，是一种良好的样品可追溯收集办法，可避免环境以及年份不准确对微生物种类的影响，对确保试验结果准确性提供了保障。 ......