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编号:39039
秘鲁鱿鱼肌动蛋白的分离纯化及结构初探
http://www.100md.com 2022年6月14日 2022年第5期
电泳,1材料与方法,1试验材料,2试剂制备,3试验仪器与设备,4试验方法,2结果与分析,1离子交换层析分离蛋白的结果分析,2SDS-PAGE凝胶电泳结果鉴定,3凝胶层析柱分离纯化的结果分析,4SDS-PAGE凝胶电泳结果
     牛付阁,胡得妹,张秀真,杜艺轩,张 斌,马 爽,潘伟春

    (浙江工商大学食品与生物工程学院 杭州 310018)

    秘鲁鱿鱼产量丰富,物美价廉,特别是营养价值高。含有8 种人体必需氨基酸,且鱼肉中的微量元素具有高钾低钠的特点,这些特点足以让人们把目光聚焦在鱿鱼上,鱿鱼也因此成为销量逐年上升的海产品[1]。目前,鱿鱼的主要加工方式是制作成鱼糜,对鱼糜原材料的要求主要是凝胶性能好,然而受到所含蛋白溶解度高、凝胶性能差、有特定的异味(酸、涩)等的限制[2],鱿鱼在食品加工中的应用并不充分,利用价值低,导致资源的浪费。

    蛋白质是一类复杂多变的生物大分子,其结构和性能密切相关。建立蛋白结构与蛋白凝胶特性间的联系,利用各种物理和化学手段调控蛋白的结构以优化其凝胶性能,是目前食品加工过程中常用的技术策略,如利用多糖与蛋白之间的互作形成多糖-蛋白凝胶[3],加入凝胶强化剂[4],改变其外界环境条件[5]等。肌原纤维蛋白是秘鲁鱿鱼蛋白形成凝胶过程中的主要作用成分,它由肌动蛋白(AC)、原肌球蛋白(TM)及副肌球蛋白(PM)等单质蛋白组成[6]。为生产出大众所接受和喜爱的产品,需进一步研究肌原纤维蛋白的结构与性能[7]。由于肌原纤维蛋白含多组分蛋白,且蛋白间存在强相互作用,这些作用力不仅会影响蛋白质整个失活过程,对调节不同分子间的交联过程也起到一定的作用[8]。因为这些表征参数大多取决于肌原纤维蛋白的组成成分,所以整体表征肌原纤维蛋白几乎是不可能的。肌原纤维蛋白组成的细微变化,可能引起这些理化指标的巨大差异,导致食品实际生产过程中经验远比理论模型更常用。理论系:Bottom-up 方法是目前解决这类问题很常见的科研策略。获取高纯度的单个组分是这一策略能否实施的关键。然而,秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白溶液中的蛋白纳米颗粒(Nano protein particle)的存在[9]揭示各组分间存在强相互作用,是分离纯化该体系的主要障碍。同时多组分的存在导致各组分在溶液中的浓度很低,进一步增大了体系分离纯化的难度;此外,分离纯化前目标蛋白质分子自身的折叠会影响分离纯化的pH 值、温度和压力等条件。因此常用的条件为室温或低温、常压以及pH 值接近等电点。这些制约条件使实验者不得不采用特殊的分离纯化仪器(蛋白纯化系统)和单元操作(色谱分离纯化技术)。同时,为达到分离纯化蛋白的目的,研究者需优化分离程序,包括色谱柱的选型,不同色谱柱的排序,色谱柱的操作条件。

    目前,对肌原纤维蛋白的研究主要集中在外界环境条件,如pH 值、压强和温度等对其凝胶性能的影响,如林伟伟等[10]研究pH 值和KCl 对肌原纤维蛋白的影响;廖慧琦等[11]研究NaCl 不同添加量对大黄鱼肌原纤维蛋白凝胶性能的影响;韩柯颖等[12]通过控制微波功率和时间 ......

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