刘 洋，陈会英，2*，范雪枫，李佳琪，朱 桐，张树彪，2

    (1 大连民族大学生命科学学院 辽宁大连 116600 2 大连民族大学 生物技术与资源利用教育部重点实验室 辽宁大连 116600)

    肿瘤是威胁人类生命的主要疾病，近年来发病率呈上升趋势。目前常用治疗方式(手术、化疗、放疗)存在复发和转移等问题，亟待寻求新的技术提高肿瘤治疗水平[1]。随着2017年首个针对血液肿瘤的免疫疗法获得美国FDA 批准，免疫疗法作为一种革新性的医疗手段，已成为最具市场潜力的肿瘤精准治疗方式[2-3]。肿瘤DNA 疫苗通过呈递亚单位肿瘤抗原刺激患者免疫应答，增强机体抗癌能力，达到预防肿瘤或者控制清除现有肿瘤的目的[4]。由于其包含的抗原具有高度限定性，能够以低的反应原性诱导集中的特异性反应，因此，肿瘤DNA 疫苗已成为肿瘤科研工作人员研究的热点之一。尽管如此，由于DNA 亚单位抗原固有的免疫触发缺陷，在临床前肿瘤模型中，DNA 疫苗的治疗效果仍然有待提高。

    多糖作为一类由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的天然高分子化合物，是构成生命的四大基本物质之一。研究表明，具有免疫调节活性的多糖，能够辅助性增强疫苗的免疫活性[5]。灵芝多糖具有广泛的生物活性，其中免疫调节活性被认为是最重要的生物活性[6-8]。由于多糖结构复杂，不同部位提取的多糖存在活性差异，因此本研究以怒江灵芝为例，利用苯酚-硫酸法[9]提取其菌托、菌柄、菌盖等不同部位多糖，考察各部位提取物对小鼠的免疫活性调节作用，筛选具有显著免疫促进功能的多糖，研究灵芝多糖作为助剂在荷瘤小鼠动物模型中对DNA 疫苗的免疫治疗促进功能，为提升DNA 等核酸疫苗的免疫治疗效果提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    怒江灵芝湿品，泸水怒丰生物科技有限公司；苯酚、浓硫酸、无水乙醇，购自国药集团化学试剂有限公司，均为分析纯级；葡聚糖标准品，阿拉丁试剂有限公司；Balb/c 雌性小鼠(清洁级)，体质量18～22 g，北京维通利华实验动物技术有限公司(实验动物研究及使用计划编号P2021011)；环磷酰胺，上海宝生物科技有限公司；苏木素伊红(HE) 染色试剂盒，北京索莱宝生物科技有限公司；4T1 细胞，中科院细胞库；1640 完全培养基，碧云天生物技术有限公司；ELISA 试剂盒、CD3+、CD4+、CD8+、INF-γ 荧光标记抗体，大连万泽贸易有限公司；HER2/neu 质粒DNA 疫苗，苏州泓迅生物科技股份有限公司。

    JA3003N 型电子天平 ......