司 睿，吴广培，王 锋，雷红涛，王 弘

    (华南农业大学食品学院 广东省食品质量与安全重点实验室畜产品精准加工与安全控制技术国家地方联合工程研究中心(广东) 广州 510642)

    微囊藻毒素(Microcysin，MC)是一种天然小分子毒素[1]，由蓝藻产生并释放到水体中[2]，主要有MC-LR、MC-LA、MC-LY、MC-LW、MC-LF、MCYR、MC-WR、MC-RR 等8 种异构体[3]，其中MCLR 毒性最强[4]，普通水厂净化不能有效去除，严重威胁人畜饮用水安全。1996年，巴西一透析中心的透析液被MC-LR 污染，导致至少26 人死亡[5]。而在我国，2007年太湖蓝藻爆发导致整个无锡市的饮用水污染[6]。此外，在长江、黄河、松花江中下游等主要河流以及鄱阳湖、武汉东湖、上海淀山湖等几大淡水湖泊中，均检测到MC-LR。构建藻毒素的快速检测方法十分必要。

    免疫分析方法是一种基于抗原与抗体特异性识别的检测技术[7]，由于特异性强、灵敏度高等优点而被广泛应用于检测分析中[8-9]。近年来，免疫分析方法发展迅速，其中以酶联免疫分析法 (Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA) 应用最广泛[10]。对于免疫分析方法而言，制备高质量的抗体是其重点与难点所在[11]。与传统多克隆抗体和单克隆抗体相比，仅由重链可变区组成的纳米抗体(Nanobody，Nb)具有稳定性强、易表达、易于基因工程操作等特性[12-13]，在免疫检测方面的应用优势越来越受到人们的关注。本研究基于实验室前期已构建好的噬菌体展示纳米抗体文库[14]，采用固相亲和淘筛的方法，制备得到特异性识别MC-LR 的纳米抗体，建立MC-LR 的间接竞争酶联免疫分析方法，并将其应用于实际样品中MC-LR 的检测。

    图1 微囊藻毒素-LR 结构式Fig.1 The structure of MC-LR

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    MCs 标准品 ......