黄璐琦，孙旭飞，苑 宁，范少华，张 伟，4，5*

    (1 河北农业大学食品科技学院 河北保定 071000 2 河北农业大学理工学院 河北沧州 061100 3 河北软件职业技术学院 河北保定 071000 4 河北农业大学生命科学学院 河北保定 071000 5 河北省人畜共患病原微生物分析与防控重点实验室 河北保定 071000)

    食源性疾病作为全球范围内的重大公共卫生问题之一，关系着人们的身体健康和生命安全。目前，引起食源性疾病的病原体包括食源性致病菌、病毒、生物毒素、药物残留、重金属、非法添加物等[1]。据WHO 报道，全球每年约有6 亿人(几乎每10 人中就有1 人) 因食用受污染的食品而患病，导致约42 万人的死亡，造成3 300 万健康生命年损失。各国每年用来治疗食源性疾病的费用约高达150 亿美元[2]。其中，食源性致病菌和病毒是造成食源性疾病的重要原因[3-4]。常见的食源性致病菌有沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等。常见的食源性病毒有诺如病毒、轮状病毒、冠状病毒、猪瘟病毒等[5-6]。生物传感器因具有响应时间快、成本低、不需要任何预富集步骤、可移植性和易于使用的优点，被广泛应用于食源性病原体的检测[7]。成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR associated proteins，CRISPR/Cas) 系统是于1987年由Ishino 等在大肠埃希菌中首次发现的[8]。它是由细菌进化出的一种具有免疫记忆的获得性免疫防御系统，用于抵制外源核酸及噬菌体的入侵[9]。CRISPR/Cas 系统具有较强的核酸识别特性，近年来逐渐被用作生物传感系统研究的识别元件。本文介绍并总结CRISPR/Cas 系统及其在食源性病原体检测中的应用。

    1 CRISPR/cas 系统

    近年来，由于成簇的规律间隔的短回文重复序列CRISPR 及其相关蛋白Cas 系统可以作为一种高效的基因组编辑工具，因此引起研究人员的关注。2019年12月，CRISPR 基因编辑技术入选了Nature 近10年中最具影响力的五项重大科学事件之一，并作为“变革生物技术”斩获了2020年诺贝尔奖[10]。CRISPR/Cas 系统通过Cas 效应蛋白-向导RNA(guide RNA，gRNA)双链体进行高特异性识别活性，使Cas 效应蛋白对靶DNA 产生切割活性[11]，引起双链断裂(Double-stranded DNA break ......