程枭杰，张玉莹，常耀光，薛长湖，唐庆娟

    (中国海洋大学食品科学与工程学院 山东青岛 266003)

    近年来，肥胖及相关代谢疾病已成为全球性疾病。肠道菌群组成和功能的变化与肥胖的发生息息相关[1]，是通过膳食干预改善肥胖的重要靶点。海藻提取物等精加工产品可调节肠道菌群，辅助改善肥胖等慢性病，是食品行业的研究热点之一[2]。紫菜隶属于红藻类，营养价值高，是一种药食同源的藻。然而，当前对于紫菜产品的研究多集中于初加工产品，为数不多的精深加工产品主要有紫菜酱、紫菜油和紫菜饮料。目前，紫菜饮料的制作主要通过水提或蛋白酶降解制备紫菜原液，并利用食品添加剂调节风味[3]。该方法制作工艺简单，然而，其中含有高分子质量紫菜多糖，导致产品黏度较大，不利于后续的澄清过滤[4]。

    紫菜多糖具有降血脂、调节免疫等多种生物活性[5]。通过物理法、化学法或酶法降解多糖，是充分发挥其生物活性，提高相关产品稳定性的有效途径[6]。酶解法条件温和且分子质量易控制，然而，专一酶不易获得[7]。沈照鹏等[8]利用市售琼胶酶降解紫菜，发现酶解可促进紫菜中营养物质溶出，尤其是总糖和还原糖含量显著增加。本实验室前期从海洋细菌中克隆一种新型GH16 β-紫菜酶，并将其与中性蛋白酶一同用于降解坛紫菜，所得复合酶解液与单纯蛋白酶酶解液相比黏度更低、紫菜转化率更高[9-10]。然而，其紫菜酶解液的生物活性仍需进一步研究。

    综上，本研究利用中性蛋白酶和紫菜多糖酶制作紫菜复合酶解液，并通过高脂饮食小鼠模型探究其对饮食诱导肥胖的影响，以及对肠道菌群的调节作用。研究结果可为提高坛紫菜的附加值提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    坛紫菜，东山县远扬藻业有限公司。SPF 级C57BL/6J 小鼠(雄性，6 周龄，n=40)，济南朋悦实验动物繁育有限公司。10%低脂饲料、45%高脂饲料，南通特洛菲饲料科技有限公司，饲料配方见表1。中性蛋白酶，南宁东恒华道生物科技有限责任公司；紫菜多糖酶Por16A_Wf，实验室自制。苏木精伊红(HE)染液，武汉赛维尔生物科技有限公司；Trizol 试剂，美国Invitrogen 公司；总胆固醇(TC)测定试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；RNA 纯化试剂盒，自天根生化科技有限公司；5×All-In-One RT 裂解反转录一体试剂盒和Eva Green Express 2×q PCR Master Mix，abm 公司。 ......