曹雪铭，徐振林*，苏燕瑜，王 宇，雷红涛，肖 剑

    (1 华南农业大学 广东省食品质量安全重点实验室 广州 510642 2 广州市食品检验所 广州 510410)

    米酵菌酸(Bongkrekic acid，BA)是唐菖蒲伯克霍尔德菌椰毒致病变种(Burkholderia gladioli pv.Cocovenenans，BGC)分泌的一种毒素，最早于20世纪30年代被荷兰学者Mertens 和Vanveen在研究爪哇居民椰子发酵食物中毒时发现[1]。流行病学研究表明，BGC 极易污染谷类制品(发酵玉米面、糯玉米汤圆、玉米淀粉等)、变质银耳和薯类制品(马铃薯粉条、甘薯淀粉、山芋淀粉等)等[2]。BA是一种强呼吸毒素，主要靶器官是肝、脑、肾等脏器[3]，一旦中毒会因呼吸衰竭而死亡[4-6]，其次由于BA 有较强的热稳定性，普通的烹饪方式很难将其去除。有研究表明人体摄入1～1.5 mg 的BA 可能引起生命垂危，而另一项研究则认为口服BA 对人体的半数致死量为3.16 mg/kg[7]。据不完全统计，自2014年以来，我国由BA 引起的食物中毒事件高达几十余起，病死率高达50%以上[8]。2018年11月广东省东莞市先、后出现5 例不明原因急性肝衰竭的病例，其中3 例死亡，在疑似变质的银耳和患者血液标本中均检出高浓度BA[9]。2020年7月28日，11 位顾客在广东省揭阳市惠来县神泉镇石头肠粉店食用河粉后，先、后出现呕吐、腹泻等疑似食物中毒症状，其中1 人死亡；2020年10月5日黑龙江鸡东县发生一起因家庭聚餐食用酸汤子引发的食物中毒事件，9 人食用后全部死亡[10]。为了预防中毒事件的发生和应对中毒后的快速治疗处理，建立BA 的快速灵敏检测方法十分必要。

    目前针对BA 的检测方法主要包括高效液相色谱法[11-12]、高效液相色谱-串联质谱[13-15]、超高效液相色谱[16]、超高效液相色谱-串联质谱[17-18]以及荧光层析法[19]等。这些方法虽然准确可靠，但是往往操作比较复杂，检测时间长，成本也较高。基于抗原、抗体特异性结合的免疫分析方法因其快速、灵敏、准确和高通量等优点而深受青睐，特别是胶体金免疫层析法(Colloidal gold immunochromatography，GICA)易操作和低成本的优势，而被广泛应用于食品安全快速筛查[20-23]。早期，刘秀梅等[24-25]制备了抗BA 的抗体并建立了间接竞争酶联免疫分析方法。然而，该方法灵敏度欠佳且尚未在实际检测中应用。对此，本研究开展了BA 特异性单克隆抗体的制备与筛选 ......