韩国全，吴任之，张 翼，饶均钥，曹芸榕，杨茂杰

    (四川农业大学食品学院 食品加工与安全研究所 四川雅安 625014)

    金黄色葡萄球菌(S.aureus)生物膜(Biofilm)是一种微生物群落，嵌在由聚合物组成的自生细胞外间质中，使微生物逃避先天免疫系统的作用，与浮游的活跃生长培养物相比，生物膜中的细胞耐药性更强，导致伤口愈合时间延长或形成不可愈合创口[1]。针对金黄色葡萄球菌生物膜的检测方法有很多，包括刚果红法、96 孔微量板定量检测法、激光共聚焦扫描显微镜等。生物膜基因(bap、icaA、icaD)、黏附相关基因(fnbA、fnbB、clfA、clfB、can)等均是导致其成膜的重要因素，其中合成细胞间黏附多糖的icaA、D、B、C操纵子的表达至关重要。Bazari 等[2]研究证明，金黄色葡萄球菌胞外多糖层与生物膜的形成有一定关系，分离株中icaA、D基因的存在与体外生物膜的形成无关。clfA、clfB是导致金黄色葡萄球菌黏附的主要因素之一。目前针对牛乳或者牛乳腺炎中该基因的研究较多，而针对生鲜猪肉的研究极少。Ren 等[3]发现奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌分离株的clfA、clfB基因的检出率为100%。

    在探索金黄色葡萄球菌生物膜形成能力同时，也需要进行多位点序列分型分析(MLST)，该分型结果可在不同实验室、地区甚至国家之间进行对比，进行全球性的流行病学调查研究。截至2021 年12 月，金黄色葡萄球菌数据库中包含7 330 种ST 型，不同金黄色葡萄球菌管家基因片段因不同的等位基因而有不同序列，扩增管家基因后测序，与MLST 数据库(http：//www.mlst.net)中的序列进行比较，即可获得等位基因谱和相应的ST 型。王琦等[4]总结了亚洲、北美洲、欧洲金黄色葡萄球菌的ST 起源及流行现状，ST59、ST72、ST772 是起源于亚洲的金黄色葡萄球菌分型，ST5/USA100、ST1/USA400、ST8/USA300 是北美洲主要的ST 型，医院获得克隆ST22/EMRSA-15 和动物中流行的ST398 都首先出现于欧洲。随着时代和社会的发展，这些ST 型也在不同地区、宿主中交叉传播。

    鉴于金黄色葡萄球菌的生物膜及不同ST 型对其耐药性、致病性等方面的较大影响，本研究对前期从雅安市生鲜猪肉中分离的金黄色葡萄球菌进行生物膜的形成和MLST 分型检测，分析分离株的成膜机制及遗传多样性，同时完善金黄色葡萄球菌的MLST 数据库。

    1 材料与方法

    1.1 试验菌株 ......