蒋舒婷，贺颖，仇丹，王亚娟*，邓尚贵

    (1 宁波工程学院材料与化学工程学院 浙江宁波315211 2 浙江海洋大学食品与药学学院 浙江舟山 316022)

    双低油菜(Canola)，亦称芥花，系芸苔属十字花科植物，为加拿大育种专家Stefsson 于1974 年通过基因改造，从普通高芥酸油菜籽改良而得的新品种[1]。与传统的油菜籽相比，双低油菜籽的芥酸含量(1 材料与方法

    1.1 材料与仪器

    秦杂油2 号冷榨油菜籽粕，由陕西省杂交油菜研究中心提供；正己烷(AR)，国药集团化学试剂有限公司；牛血清蛋白(AR)、考马斯亮蓝G-250(AR)、8-苯胺-1-萘磺酸(ANS，AR)、三(羟甲基)氨基甲烷(Tris，AR)，北京索莱宝科技有限公司；磷酸(AR)，国药集团化学试剂有限公司；PBS缓冲液，厦门海标科技有限公司；甘氨酸(AR)、β-巯基乙醇(AR)，宁波萃英化学技术有限公司；乙二胺四乙酸(EDTA，AR)、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB，AR)、三氯乙酸(TCA，AR)，上海麦克林生化科技有限公司；尿素(AR)，天津市大茂化学试剂厂；十二烷基硫酸钠(SDS，AR)，国药集团化学试剂有限公司。

    高速多功能粉碎机，武义海纳电器有限公司；TG16-WS 台式高速离心机，湖南湘仪实验室仪器开发公司；手持式pH 检测计，东莞万创电子制品有限公司；KEEZO 加热磁力搅拌器，上海精凿科技有限公司；Scientz-10N 台式冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司；JRJ300-D-I 剪切乳化机，上海标本模型厂。

    1.2 油菜籽粕预处理

    利用高速多功能粉碎机将油菜籽饼粕粉碎为75～270 μm 的颗粒，而后按料液比1∶4 加入正己烷，通风橱中机械搅拌1 h 后于8 000×g 条件下离心10 min，回收上清液，继续往不溶物中加入正己烷，搅拌离心，重复3 次。而后将不溶物平铺在锡箔纸上置于通风橱自然风干，得脱脂油菜籽粕粉。

    1.3 油菜籽分离蛋白的提取

    称取适量脱脂油菜籽粕粉，按料液比1∶20(g/mL)加入去离子水，而后使用NaOH 溶液将pH 值调至11.0，25 ℃机械搅拌2 h，期间每隔15 min 检查混合溶液的pH 值并保证其在10.5～11.0，然后于5 600×g 条件下离心10 min，留上清液过滤。

    碱溶酸沉法：将上述滤液用HCl(1.0 mol/L)调pH 值至4.5～5.0，而后于4 ℃静置4 h ......