短链脂肪酸气相色谱-质谱测定方法的建立
丁酸,丙酸,盲肠,1材料与方法,1实验动物及饲养环境,2材料与试剂,3主要仪器设备,4气相色谱条件,5质谱条件,6试验方法,2结果与分析,1线性关系,2精密度,3回收率,4小鼠粪便,结肠中SCFAs的含量,3结论
卜子晨,郑诗琪,王 佳,夏永军,艾连中,王光强(上海理工大学健康科学与工程学院 上海食品微生物工程技术研究中心 上海 200093)
短链脂肪酸(SCFA)是肠道微生物的重要代谢产物。它们主要由厌氧微生物的多糖、寡糖、蛋白质、多肽和糖蛋白前体形成[1]。短链脂肪酸是饱和脂肪酸的一个子集,含有6 个或更少的碳分子,包括乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和己酸[2]。在人体中,乙酸、丙酸和丁酸是肠道发酵产生的3 种主要短链脂肪酸,占肠道短链脂肪酸含量的95%,宿主产生短链脂肪酸的主要部位是结肠和盲肠[3]。其中SCFAs 的浓度在近端结肠较高,在远端结肠较低。SCFAs 参与人体代谢,在肝脏、骨骼肌、脂肪组织和胰岛等不同器官中具有重要功能,可以直接影响碳水化合物代谢和脂质利用,并通过副交感神经系统间接调节能量代谢[4]。SCFAs 被报道可以缓解肥胖、糖尿病,抑制炎症和肿瘤细胞生长[5-7]。近年SCFAs 的测量已被用于研究许多疾病。粪便标本是研究SCFAs 浓度与疾病之间相关性的最常用标本,它能够反映结肠中SCFAs 的产生与吸收之间的平衡[8]。为了分析饮食、肠道微生物群和宿主健康之间的关系,需要可靠、方便、灵敏的方法来准确测定短链脂肪酸的含量。
生物样品中SCFAs 的分析方法多种多样,其中包括高效液相色谱(HPLC)联合紫外检测[9]、固相微萃取气相色谱-质谱联用技术(SPME-GCMS)[10]、核磁共振(NMR)[11]、毛细管电泳(CE)[12]等。由于SCFAs 具有较强的挥发性,在所有用于测定短链脂肪酸的设备中,气相色谱是最广泛用于短链脂肪酸分析的设备,并且与质谱联用具有更好的灵敏度和选择性[13]。然而,直接进样分析回收率较低,并存在杂质污染气相色谱柱的现象[14]。由于丙酸峰面积比较小,因此直接进样也很难使其明显出峰。为了提高检测灵敏度和对柱子较少的损害,衍生化方法是更好的选择。由于挥发性酸物质较难检测,且峰很难分离,因此硅烷化方法是气相色谱分离挥发性酸的一种常用方法 ......
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