宗帅州，辛丽娜，白佳琪，韩剑众，曲道峰

    (浙江工商大学 杭州 310018)

    中国是禽肉消费大国，自2017 年以来，中国的肉鸡出栏量已超过每年100 亿只鸡[1]。在鸡养殖过程中，大肠杆菌被认为是主要病原体[2]。致病性大肠杆菌往往会引起重大传染病，其症状多为呼吸道感染、卵黄囊感染、肠炎、败血症、浆膜炎和输卵管炎等[3]。此外，大肠杆菌还能与其它病原体共同作用于宿主，造成混合感染，其高发病率与高死亡率，给畜禽养殖业造成巨大的经济损失[4]。目前来看，抗生素仍是治疗大肠杆菌感染的主要手段，然而，在鸡养殖产业中大量使用治疗性抗生素与抗生素生长促进剂已经引发严重的动物源和食源性细菌耐药性问题[5]。据高玉斌等[6]的报告，2017年于国内7 个代表性地区(山西、山东、西藏、云南、新疆、江苏、吉林)养殖场中分离到130 株鸡源大肠杆菌，对四环素、氨苄西林、磺胺异噁唑、复方新诺明、氟苯尼考的耐药率分别为91.54%，90.77%，78.13%，79.83%，81.25%。据唐标等[7]的报道，2019 年于湖南省部分鸡养殖场中分离到的146 株大肠杆菌对四环素、氨苄西林、磺胺异噁唑、复方新诺明、氟苯尼考的耐药率分别为87.7%，85.0%，78.1%，75.3%，67.1%。从以上数据来看，国内鸡源大肠杆菌耐药率处于较高的水平，耐药情况非常严重，而养殖环境中的耐药菌不仅提高畜禽细菌病治疗难度，也可以通过污染水源、土壤传播给人，还可以通过禽类产品加工链进行更广泛的传播[8]。我国虽然已经开展动物源细菌耐药性检测，但是仅在省级层面对个别养殖场进行样品采集，对于市级层面的耐药菌研究仍存在很大空缺[9]。

    本研究对浙江省湖州、嘉兴、绍兴市共12 家肉鸡养殖场进行粪便与环境样品的采集，通过16S rRNA 测序进行菌株鉴定，对分离得到的大肠杆菌进行耐药表型与基因型检测，共现网络分析整合子与耐药基因的相关性，揭示耐药基因的传播特点，为鸡源耐药菌的监测提供依据，为当地保证食品安全提供数据支持。

    1 材料与方法

    1.1 样品采集

    2021 年5 月分别从浙江省3 市共12 家养殖场(每市各4 家养殖场)中，各采集粪便样品20份、土壤样品20 份，污水样品20 份，共720 份样品置于无菌样品袋与采样管中。样品采集后均立刻置于低温(2～8 ℃)样品箱中，待采样结束后运至实验室进行大肠杆菌分离。

    1.2 主要试剂

    Mueller-Hinton肉汤、脑心浸液(BHI)培养基、缓冲蛋白胨水(BPW)、细菌琼脂粉 ......