黄 天，刘凯龙，刘晓晔，姚国强，孙天松

    (内蒙古农业大学 乳品生物技术与工程教育部重点实验室 农业农村部奶制品加工重点实验室 呼和浩特 010018)

    益生菌是指摄入足够量后，对人体健康产生益处的一类活的微生物的总称[1]。乳杆菌属、双歧杆菌属，以及乳球菌、嗜热链球菌和酵母菌等作为目前益生菌产业中主要应用的微生物[2]，其的安全性与稳定性问题不容忽视。

    益生菌株的筛选标准极严格，大多数菌株通常来自于无致病菌历史、健康人群的胃肠道。菌株需具备在胃肠道中定植的能力，同时兼具较高的耐酸和耐胆盐能力[3]。在此基础上，通过对菌株全基因组测序结果进行深度分析，并结合微生物学检测和毒理学评价等，对其所携带的耐药基因、致病性基因和环境抗性基因进行系统阐述[4]。以人群试验和临床试验结果为重要评判指标，最终确定菌株是否具有安全性[5]。然而，随着菌株的流通和广泛使用，菌株往往会出现衰退现象，具体表现为，原有形态变得不典型，发酵周期变长，发酵特性变差，抗不良环境减弱等生物学特性。因此，深入研究与评估益生菌的遗传稳定性具有重要意义[6]。

    鼠李糖乳杆菌Probio-M9 是由内蒙古农业大学团队于2017 年从健康妇女母乳样中分离得到的1 株具有潜在益生特性的益生乳酸菌[7]，其在胃肠液中具有较强的存活率，同时鼠李糖乳杆菌Probio-M9 还可通过肠道-脑轴途径改善应激后成人的心理和生理生活质量以及通过调节肠道环境和改善炎症来抑制大肠肿瘤的形成等[8-10]。本研究以鼠李糖乳杆菌Probio-M9 为研究对象，从菌株形态变化、碳水化合物利用能力以及菌株代谢特性等多方面对其在连续传代培养(100 代)过程中的稳定性进行系统评价，同时结合比较基因组学深入分析其遗传稳定性，找寻其进化的基本规律，确保其具备优良的遗传稳定性，为鼠李糖乳杆菌Probio-M9 后续更深层次的研究提供理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料

    1.1.1 菌株来源 鼠李糖乳杆菌Probio-M9 菌株由内蒙古农业大学“乳品生物技术与工程”教育部重点实验室乳酸菌菌种资源库(LABCC)提供。

    1.1.2 设备与仪器 HWS28 型电热恒温水浴锅，天津知署科技有限公司；立式低速离心机，德国Eppendorf 公司；恒温培养箱，上海恒科技仪器有限公司；DG250 厌氧工作站，英国DWS 公司；EF20 pH 计，瑞士梅特勒-托利多公司；UV-1100微量紫外分光光度计，NanoDrop 公司；BX50 光学显微镜 ......