惠珍珍，李 娜，王晓萱，孙舒扬，王 平，杜 超，3，4*

    (1 鲁东大学食品工程学院 山东烟台264025 2 鲁东大学生物纳米技术研究院 山东烟台264025 3 烟台市预制食品纳米科学与技术重点实验室 山东烟台264025 4 烟台市绿色食品加工与质量控制工程研究中心 山东烟台 264025)

    文蛤(Meretrix meretrix Linnaeus)又称为蛤蜊，是重要的食用贝类之一，主要分布在我国沿海地区[1]。新鲜文蛤含水量约为85%，灰分含量约为1%，总糖含量约为2%，粗蛋白质含量约为11%，其中水溶性蛋白约占45%，可作为活性组分的良好来源[2]。文蛤多肽是文蛤提取物中重要的生物活性成分，近代研究发现，它具有抗氧化、抗肿瘤、消除炎症、抗衰老，调节机体免疫功能等多种活性作用[3-5]。

    免疫活性肽是指具有免疫活性的分子质量相对较小的寡肽。免疫活性肽的种类较多，包括从动植物组织器官中和微生物体内提取的生物活性肽、食源性蛋白质酶解生成的一些寡肽，以及利用化学法合成或DNA 重组来生成的一些寡肽等[6-8]。目前免疫活性肽制备最常用方法是酶解法，这是因为酶解法的生产条件比较温和、安全性较高的同时又具有价格优势，且专一性强。He 等[9]采用碱性蛋白酶对波纹巴非蛤进行酶解，得到的最佳酶解条件为温度51 ℃，时间3.14 h，酶添加量4 321 U/g。刘静波等[10]用5 种蛋白酶对豆粕进行酶解，筛选出复合蛋白酶为最佳用酶，并对其制备工艺进行优化，当底物质量浓度0.04 g/mL，加1%的酶，调节pH 值至6.5 时在50 ℃酶解7 h，豆粕肽得率最高。胡旭阳等[11]利用日本黄姑鱼鱼肉制备多肽，确定最适用酶为木瓜蛋白酶，经过优化得到当料液比1∶11，pH 6，于59 ℃酶解5.4 h 时，所得多肽对RAW264.7 细胞的相对增殖率近62%。

    本研究是酶解文蛤以制备免疫活性肽，先筛选最适用酶，然后对酶解条件进行优化，从而确定文蛤免疫活性肽的最佳制备条件，并对其免疫活性进行研究，为文蛤蛋白制备新型免疫活性肽提供参考依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料、试剂与主要仪器

    文蛤，山东省烟台市文化路市场；RAW264.7细胞(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)，中国科学院细胞库；碱性蛋白酶、复合蛋白酶，北京Solarbio公司；木瓜蛋白酶，上海生物工程公司；胃蛋白酶、胰蛋白酶，美国Sigma 公司；DMEM 培养基、胎牛血清，武汉普诺赛公司；CCK-8 试剂盒、一氧化氮(NO)试剂盒 ......