田玥玮，张永坡*，高春艳，赵晋忠，杜维俊

    (1 山西农业大学基础部 山西晋中030801 2 山西农业大学农学院 山西晋中 030801)

    纳豆是以煮熟的大豆为原料，通过接种纳豆菌发酵而成的一种传统保健食品[1]，除了含有纳豆激酶、SOD、异黄酮等多种活性物质外，还富含氨基酸、有机酸、寡聚糖等有益于人体肠道健康的营养成分[2]。近年来，由于人们越来越关注纳豆类产品的保健功能，国内外学者研究了纳豆及其主要活性物质纳豆激酶的多种功能作用[3]，结果发现其具有治疗心血管疾病[4]、溶解血栓[5]、降血压[6]、抗癌[7]、抗氧化[8]等保健功能。黑豆含有多酚、花色苷、黄酮等多种活性物质，相对于黄豆含量更高，因此黑豆更具药用价值[9]。研究表明，食用黑豆能够增加多酚浓度，有助于改善血管功能，并通过减少人体氧化应激，从而降低患心血管疾病的风险[10]。本文以壶关大黑豆为原料，发酵制备提取纳豆激酶粗提取物，得到黑豆纳豆激酶粗提取物(Black bean nattokinase crude extract，BNCE)。

    动物实验表明，纳豆激酶通过口服给药能减少大鼠颈动脉形成的血栓质量，具有显著的溶栓效果[11]。本文以不同浓度的BNCE 进行处理，研究其对小鼠的体外溶栓作用，以期为黑豆纳豆激酶溶栓作用的深入研究提供数据支持。

    除此之外，有研究发现许多天然产物成分对RAW264.7 细胞具有免疫促进[12]或免疫抑制[13]或二者兼具的双向免疫调节作用[14]。目前关于纳豆激酶的免疫调节作用尚未见报道。为研究BNCE对细胞免疫调节的影响，本研究以RAW264.7 细胞为试验模型，研究BNCE 对正常状态及脂多糖(LPS)激活状态下RAW264.7 细胞的免疫调节作用，以期为纳豆激酶的免疫调节作用机制提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料

    壶关大黑豆，山西农业大学遗传与种质创新实验室；RAW264.7 细胞，天津医科大学。

    1.2 主要试剂

    纳豆菌粉，尚川生物科技有限公司；二甲基亚砜(DMSO)，阿拉丁公司；氯化钠、硫酸铵、溴化钾、乙醇、冰乙酸，天津大茂化学试剂厂；纤维蛋白原、尿激酶、凝血酶、琼脂、RPMI Medium 1640 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、脂多糖(LPS)、噻唑蓝(MTT)、中性红染色液、小鼠白细胞介素-6 试剂盒、小鼠肿瘤坏死因子-α 试剂盒、小鼠白介素-1β试剂盒，北京索莱宝有限公司。

    1.3 主要仪器与设备 ......