副干酪乳杆菌发酵液中抗菌肽的筛选及对副溶血性弧菌的抑菌作用
通透性,1材料与方法,1材料与试剂,2仪器与设备,3方法,2结果与分析,1副干酪乳杆菌发酵液中潜在抗菌序列的筛选与鉴定,2肽Yt9z对副溶血性弧菌的抑菌活性,3抗菌肽Yt9z对副溶血性弧菌的抑菌机制研
邢宇凡,白淑锦,金日天,3,翁武银,3,丁能水,张志刚,杨 燊,3*(1 集美大学海洋食品与生物工程学院 福建厦门361021 2 厦门银祥集团有限公司 肉食品安全生产技术国家重点实验室 福建厦门361100 3 海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心 大连工业大学 辽宁大连116034 4 福建傲农生物科技集团股份有限公司 福建省生猪营养与饲料重点实验室 福建漳州 363000)
副溶血性弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐细菌,主要存在于鱼、虾、贝类等水产动物以及腌菜、咸肉和咸鸭蛋等高盐食品中[1]。它是一种常见的食源性病原体,可引发腹泻、呕吐、头痛、腹部痉挛等病症[2]。此外,它还可以形成保护宿主的生物膜,从而对抗生素产生耐药性[1,3]。发掘更安全、有效的抑菌剂至关重要。
抗菌肽是一种具有广泛抑菌活性的阳离子多肽,可对病原体进行多靶点破坏,如通过静电作用破坏细胞膜,作用于核酸,从而影响DNA、RNA 以及蛋白质的合成等[4],且不易产生耐药性,被认为是抗生素的一种良好替代品[5-6]。副干酪乳杆菌作为乳酸菌的一种,具有抗肿瘤、抗炎、改善和调节肠道菌群等生物活性[7]。其在发酵过程中产生的细菌素,能有效抑制食源性致病菌,可应用于热敏性食品的冷链运输保鲜[8-9]。如从副干酪乳杆菌FX-6中分离出细菌素F1,其对细菌和真菌均具有较好的抑菌活性,可以通过增加细菌膜的通透性,促进细胞内物质的渗漏,干扰细胞中基因组DNA,从而完成杀菌作用[10]。
本研究采用超高效液相色谱-质谱联用技术鉴定副干酪乳杆菌发酵液小分子多肽序列,通过生物信息学筛选出可能具有抑菌活性的氨基酸序列,合成后研究其对副溶血性弧菌的抑菌活性及机理,以期为副溶血性弧菌的防治提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
副干酪乳杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)由福建省微生物与酶工程重点实验室提供,MRS 培养基、营养肉汤培养基、LB 培养基,广东环凯微生物科技有限公司;琼脂,厦门兰博利德生物技术有限公司;TIANamp Bacteria DNA Kit 细菌基因组DNA 提取试剂盒(DP302),北京天根生化科技有限公司。
核酸染料10×DNA 上样缓冲液,北京索莱宝(Solarbio)科技有限公司;十二烷基硫酸钠(SDS) ......
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