王素平 武筱林 王 帅 宋 涛 庄 洁 兰小磊

    (1.青岛市第三人民医院神经康复科，山东 青岛，266041；2.青岛大学医学部中西医结合中心，山东 青岛，266021；3.青岛大学附属医院神经外科，山东 青岛，266003)

    随着人口的老龄化，老年性疾病发病率越来越高。其中，血管性痴呆 (Vascular dementia，VaD)是由脑血管疾病引起的一种脑损害[1]。目前关于VaD的标准定义国际上尚未统一，但Vad肯定会导致认知以及智能障碍，其根本的治疗方法是防治脑血管病及其危险因素[2-4]。研究证明，VaD发病后，随着病情的发展，神经元逐渐出现大量死亡和凋亡，因此，抑制神经元的凋亡可能是治疗VaD有效措施之一[5-6]。近年研究发现，脑蛋白水解物制剂等能通过恢复脑功能而提高患者的认知和智力水平，但具体作用机制尚不明确[7]。神经肽制剂脑活素( Cerebrolysin，CBL)是从纯化的脑蛋白中提取的，主要有效成分是氨基酸(80%)和小肽(20%)，具有一定的神经营养作用，可改善VaD患者认知能力、抑制大脑中动脉远端闭塞后引起的大鼠丘脑神经元凋亡，改善大鼠神经功能等[8-11]。国内注射用脑蛋白水解物-I(Cerebroprotein Hydrolysate-I，CH-I)采用类似CBL的提取工艺和质量标准。已研究证明，注射用CH-I可以通过提高端粒酶活性从而延缓脑衰老，改善脑梗死大鼠的行为功能，其改善VaD大鼠学习认知能力可能与促进脑损伤后的神经元修复和生长有关[12-14]。本实验旨在探讨CH-I干预VaD小鼠海马区神经元凋亡的作用和可能的机制。

    1 材料

    1.1 实验动物

    成年健康雄性昆明小鼠70只，SPF级，鼠龄4～6周，体质量25～30 g，动物合格证号：SCXK(鲁)20190003，由济南朋悦实验动物繁育有限公司提供。实验前将动物置于实验室鼠龄适应环境1周，自由饮食，室温(3±2)℃，12 h间隔昼夜明暗环境。整个实验过程严格遵守动物伦理学要求(QDYXB-WZLL20230523)。

    1.2 药品与主要试剂

    注射用脑蛋白水解物-I(CH-I)(生产企业：河北智同生物制药股份有限公司，生产批号：0190501-1)；脑活素(CBL)(生产企业：EVER Neuro Pharma GmbH，生产批号：PB0947)；HE染色试剂盒(G1120)(生产企业：北京索莱宝科技公司)、DAB显色试剂盒(DA1015)(生产企业：北京索莱宝科技公司)；TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(MK1020)(生产企业：博士德生物工程公司)；Akt(8200S)(生产企业：Cell Signaling Technology Co. Ltd.)、p-Akt(8200S)(生产企业：Cell Signaling Technology Co. Ltd.)、山羊抗兔抗体(7074P2)(生产企业：Cell Signaling Technology Co. Ltd.)；Bcl-2(ab182858)(生产企业：Abcam)；Casp-3(AF6311)(生产企业：Affinity Co. Ltd.)、Casp-9(AF6348)抗体(生产企业：Affinity Co. Ltd.)、双敏化学发光试剂均(KF005)(生产企业：Affinity Co. Ltd.)；BCA蛋白浓度测定试剂盒(生产企业：Biosharp Life Science Co. Ltd) ......